为获得Bt杀虫蛋白的转基因马铃薯.研究人员把苏云金杆菌中的Bt杀虫蛋白基因导入马铃薯体细胞.从培育出转基因马铃薯新品种．回答下列问题:(1)Bt杀虫蛋白基因来自苏云金杆菌．可利用苏云金杆菌细胞内合成的mRNA通过逆转录形成单链DNA片段.从而获得目的基因．在生物体外采用PCR技术扩增目的基因.扩增时需要加入引物.其引物是能与目的基因配对的一段脱氧核� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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15．为获得Bt杀虫蛋白的转基因马铃薯，研究人员把苏云金杆菌中的Bt杀虫蛋白基因导入马铃薯体细胞，从培育出转基因马铃薯新品种．
回答下列问题：
（1）Bt杀虫蛋白基因来自苏云金杆菌．可利用苏云金杆菌细胞内合成的mRNA通过逆转录形成单链DNA片段，从而获得目的基因．在生物体外采用PCR技术扩增目的基因，扩增时需要加入引物，其引物是能与目的基因配对的一段脱氧核苷酸序列．
（2）除了通过上述方法可以获取Bt杀虫蛋白基因外，还可以通过化学合成的方法获取Bt杀虫蛋白基因，其前提条件是通过Bt杀虫蛋白的Bt杀虫蛋白的氨基酸序列推导出mRNA核苷酸序列，再合成该基因的脱氧核苷酸序列，这样合成的目的基因与从cDNA文库获取的目的基因相比，脱氧核苷酸序列可能不相同，原因是密码子具有简并性（一个氨基酸可对应多种密码子）．
（3）构建基因表达载体时，通常用同种限制性核苷酸内切酶分别切割含目的基因的DNA片段和质粒，原因是使目的基因的DNA片段和质粒具有相同的黏性末端，便于构建（连接）成基因表达载体．用农杆菌转化法将基因表达载体导入植物细胞，此过程利用了Ti质粒具有T-DNA可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上特点．
（4）从个体生物学水平鉴定转基因马铃薯的培育是否成功，需要对转基因马铃薯进行抗虫的接种实验．

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、PCR技术：
（1）概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术．
（2）原理：DNA复制．
（3）前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物．
（4）条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）
（5）过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．

解答解：（1）逆转录是mRNA形成单链DNA片段的过程．PCR技术中引物是能与目的基因配对的一段脱氧核苷酸序列．
（2）通过化学合成的方法获取Bt杀虫蛋白基因，其前提条件是通过Bt杀虫蛋白的氨基酸序列推导出mRNA核苷酸序列，再合成该基因的脱氧核苷酸序列．化学合成的方法合成的目的基因与从cDNA文库获取的目的基因相比，由于密码子具有简并性或一个氨基酸可对应多种密码子，因此脱氧核苷酸序列可能不相同．
（3）构建基因表达载体时，通常用同种限制性核苷酸内切酶分别切割含目的基因的DNA片段和质粒，使目的基因的DNA片段和质粒具有相同的黏性末端，便于构建（连接）成基因表达载体．农杆菌的Ti质粒具有T-DNA可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上特点．
（4）从个体生物学水平鉴定转基因马铃薯的培育是否成功，需要对转基因马铃薯进行抗虫的接种实验．
故答案为：
（1）mRNA     能与目的基因配对的一段脱氧核苷酸序列
（2）Bt杀虫蛋白的氨基酸序列      密码子具有简并性（一个氨基酸可对应多种密码子）
（3）使目的基因的DNA片段和质粒具有相同的黏性末端，便于构建（连接）成基因表达载体
T-DNA可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上
（4）抗虫的接种实验

点评本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤中，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．

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①则该同学共需要设置12个培养基，设置牛肉膏蛋白胨培养基做为对照的目的是判断该培养基是否起到选择培养的作用．
②若稀释倍数为10⁵倍的三个平板中的菌落数分别为8、10、11，则不能（填“能”或“不能”）直接用该稀释倍数下的测量数据进行计数，正确的做法是取更低稀释倍数的菌液进行涂布，直到培养基的菌落数在30〜300之间．
（3）以尿素为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后，加入酚红指示剂后变红色，能说明“目的菌”能分解尿素的原因是细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH增高，使酚红指示剂变红．

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11．下列关于生命科学发展过程中重大研究成果的叙述，其中研究方法最相近的一组是（　　）
①温特证明了胚芽鞘的尖端存在某种物质可促进生长
②孟德尔通过豌豆杂交实验揭示了遗传因子的分离定律
③摩尔根等人用果蝇为材料研究证明了“基因位于染色体上”
④林德曼发现生态系统中能量流动的特点．

A．

①和②

B．

③和④

C．

①和④

D．

②和③

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20．

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海藻酸钠质量浓度（g/dL）	凝胶强度	凝胶气泡量	成球难度	凝珠形状
1．0	中	没有	较易	扁圆形
2．0	中	少量	易	圆球形
3．0	强	较多	稍难	有托尾
4．0	强	大量	难	难成球形