[题目]血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分.负责血液中O2或CO2的运输.请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题. (1)将实验流程补充完整:A为血红蛋白的释放.B为 .凝胶色谱法是根据而分离蛋白质的有效方法.(2)洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白.洗涤次数过少.无法除去 ;离心速度过高和时间过长会使一同沉淀.达不到分离的效果.洗� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。

（1）将实验流程补充完整:A为血红蛋白的释放，B为_______。凝胶色谱法是根据____________而分离蛋白质的有效方法。

（2）洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白（血浆蛋白），洗涤次数过少，无法除去______;离心速度过高和时间过长会使_________一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是_____________。释放血红蛋白的过程中起作用的是___________。

（3）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液（pH为7.0）的目的是_________________。如果红色区带__________，说明色谱柱制作成功。

【答案】样品的加入和洗脱相对分子质量的大小血浆蛋白白细胞和淋巴细胞离心后的上清液中没有黄色蒸馏水和甲苯准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内一致均匀一致地移动

【解析】

1、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：

（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白。

（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。

（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。

（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2、分析题图：A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱。

（1）样品处理过程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析，所以A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱；凝胶色谱法的原理是分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
（2）洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白，释放血红蛋白的过程是让红细胞吸水胀破。如果分层不明显，可能是洗涤次数少，未能除去血浆蛋白的原因；此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度；重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净；由于甲苯是表面活性剂的一种，可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，而蒸馏水可使红细胞吸水涨破细胞膜。
（3）磷酸缓冲液（pH为7.0）能够准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致；如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢均匀一致地移动，如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。

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（1）研究发现，CRISPR/Cas9仅存在于原核生物，故需借助____________技术才能在水稻细胞中发挥作用。Cas9蛋白与_____________酶的功能相似。

（2）首先依据___________的部分序列设计DNA片段A（负责编码相应引导RNA），再将片段A与含有Cas9基因的质粒B连接，以构建编辑水稻Q基因的CRISPR/Cas9系统基因表达载体（如图所示）。位点Ⅰ、位点Ⅱ分别表示_____________酶切位点。

（3）质粒B大小为2.5kb（位点Ⅰ与位点Ⅱ相隔60b），经酶切后的片段A大小为0.5kb（千碱基对），连接形成的表达载体大小为___________kb。

（4）常用农杆菌转化法将目的基因导入水稻受体细胞，依据农杆菌的侵染特点，目的基因将插入到Ti质粒的_______上，经过转化作用，进入水稻细胞，并将其插入到____________，从而使其得以维持稳定和表达。

（5）CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成脱靶，试从引导RNA的角度分析脱靶的原因_________________________________________________。

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