Question

下表为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点．如图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处分别有BamHⅠ，EcoRⅠ，BamHⅠ，PstⅠ的酶切位点．假设所用的酶均可将识别位点完全切开，为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，应选用的酶是（　　）

限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ
识别序列和切割位点

• A、用BamHⅠ酶切
• B、用EcoRⅠ酶切
• C、用BamHⅠ，EcoRⅠ酶切
• D、用BamHⅠ，EcoRⅠ，PstⅠ酶切

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：由于限制酶具有特异性，一种限制酶只能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并形成特定的黏性末端．题干中提出“为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状”，即要求目的基因两侧的黏性末端不同，因此一般选择不同的限制酶进行切割．

解答： 解：A、BamHⅠ酶在目的基因的1处和3处有切割位点，因此目的基因两端将被切割成相同的黏性末端，这将会导致自身环化，A错误；
B、EcoRⅠ酶只在目的基因的2处有切割位点，只用这一种酶无法切割目的基因，B错误；
C、表格中可以看出，BamHⅠ酶和EcoRⅠ酶识别序列和切割位点不同，并且EcoRⅠ酶的切割位点在2处，即两种酶处理后目的基因的2处和3处被切割，并形成不同的黏性末端，可以防止目的基因自身环化，C正确；
D、PstⅠ酶的切割位点在4处，即不影响BamHⅠ酶3处的切割位点，因此用这三种酶处理后，目的基因仍在2处和3处被切割，因此可以防止目的基因的自身环化，D正确．
故选：CD．

点评：本题具有一定的难度，属于考纲中理解层次的要求，着重考查了限制酶的特点及应用，在基因工程中，一般为防止质粒或目的基因自身环化，一般选择不同的限制酶分别切割目的基因和质粒，以形成不同的黏性末端．