Question

【题目】炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病，炭疽杆菌的检测有多种方法。请回答下列问题：

（1）为从炭疽病疑似患者体内分离出炭疽杆菌，将采集到的患者皮肤脓包渗出物稀释后取____mL滴于培养基表面，用______涂匀，这种接种方法称为稀释涂布平板法。

（2）在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水，用____挑取菌种进行无菌操作，置于载玻片的水滴中，与水混合做成悬液并涂成直径约1cm的薄层，为避免因____________，不利于观察个体形态，可在载玻片上原菌液旁的一侧再加一滴水，从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行____，涂布成薄层。再经过沙黄荚膜染色镜检，观察形态及荚膜特征，可以初步诊断。

（3）下图是通过噬菌体裂解实验进行确诊的过程图，请据图回答：

①液体培养基35℃、24 h培养的目的是_________________________。

②图中对照组需要加入______________________。

③若实验结果是___________，则可以确诊被检者被炭疽杆菌感染。

Answer 1

【答案】0．1 无菌（或已灭菌）涂布器 接种环 细菌过多聚集成团（或细菌过多堆积在一起） 稀释 菌种（微生物）扩大培养 等量的生理盐水 对照组混浊，实验组澄清

【解析】

1、培养基的基本成分：水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子；

2、无菌操作，包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌；

3、微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法。

4、微生物实验室分离中配制培养基的操作步骤：计算→称量→溶解→调pH→灭菌步骤。

5、培养基的分类有按物理性质分有固体、半固体、液体培养基；按用途分为选择培养基和鉴别培养基。

（1）将采集到的患者皮肤脓胞渗出物稀释后取0.1mL滴于培养基表面，用无菌涂布器涂匀，最终分离得到单菌落，这种接种方法称为稀释涂布平板法。

（2）常用的接种工具是接种环，用接种环挑取菌种置于玻片的水滴中制成菌悬液，为了避免细菌过多聚集成团，可将菌悬液进行稀释，具体做法为在载玻片上原菌液旁的一侧再加一滴水，从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释，涂布成薄层，显微镜下观察。

（3）接种可疑菌后，35℃培养24小时，目的是将菌种（微生物）扩大培养，细菌大量繁殖，液体培养基变浑浊。对照组试管中应加入等量生理盐水，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低（或对照组混浊，实验组澄清），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。此实验依据的原理是实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄清。