Question

12．中国科学家成功将肝再生增强因子（hALR）的基因导入羊的乳腺上皮细胞中，再利用核移植技术培育出了转基因克隆羊，其乳汁含有hALR．回答下列问题：
（1）在体外，可通过PCR技术扩增hALR基因，该技术依据的原理是DNA双链复制．为了保证PCR反应的进行，反应体系需要加入耐高温Taq（DNA聚合）酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、引物等．
（2）将外源hALR基因导入乳腺上皮细胞常用的方法是显微注射法，检测其染色体上是否整合了hALR基因，可采用DNA分子杂交技术；将乳腺上皮细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，对受体卵母细胞的处理是培养至MⅡ中期并去核．
（3）与转基因工程菌（大肠杆菌）相比，利用羊乳腺生产出的hALR有生物活性，其原因可能是hALR合成后需要经过内质网、高尔基体的加工才具备生物活性．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
4、目的基因的检测与鉴定：
（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）PCR技术依据的原理是DNA双链复制．为了保证PCR反应的进行，反应体系需要加入耐高温Taq（DNA聚合）酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、引物等．
（2）将外源hALR基因导入乳腺上皮细胞常用的方法是显微注射法，检测其染色体上是否整合了hALR基因，可采用DNA分子杂交技术；将乳腺上皮细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，受体卵母细胞需要培养至减数第二次分裂中期，并且需要去核．
（3）原核细胞只有核糖体，没有其它细胞器，因此与转基因工程菌（大肠杆菌）相比，利用羊乳腺生产出的hALR有生物活性，原因是hALR合成后需要经过内质网、高尔基体的加工才具备生物活性．
故答案为：
（1）DNA双链复制       Taq（DNA聚合）       引物
（2）显微注射法    DNA分子杂交     培养至MⅡ中期并去核
（3）hALR合成后需要经过内质网、高尔基体的加工才具备生物活性

点评 本题考查基因工程、细胞核移植、原核细胞和真核细胞的异同点等知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤；识记原核细胞和真核细胞在细胞结构上的区别．