Question

11．下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题．步骤如下：
A．制备稀释倍数为10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀释液．
B．如图是采用纯化酵母菌培养的两种接种方法接种后培养的效果图．
（1）对大肠杆菌进行数量测定选用图[A]稀释涂布平板法接种样品．
结果分析：
C．适宜温度下培养．
（2）测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是D
A．一个平板，统计的菌落数是53
B．两个平板，统计的菌落数是12和78，取平均值45
C．三个平板，统计的菌落数分别是5、85和60，取平均值50
D．四个平板，统计的菌落数分别是44、31、64和55，取平均值48.5
（3）一同学在稀释倍数为10⁵的培养基中测得平板上菌落数的平均值为43.4，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL）4.34×10⁷个．
（4）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量少，因为当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落．
（5）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？不能，为什么？因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程．
（6）自己在家中制作的果醋很容易受大肠杆菌等微生物的污染，而包装瓶上写着105℃高温瞬时的果醋瓶上写着“不含任何防腐剂，最长保质期为一年”，其中的奥秘是高温杀死了微生物．

Answer 1

分析 1、平板划线法是接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的造作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，在数次划线之后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的子细胞群体-菌落；稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同梯度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基上，进行培养获得由单细胞繁殖而来的菌落．
2、对微生物进行分离、计数常用的接种方法是稀释涂布平板法，估算每毫升样品中的细菌数时，往往选取30～300的平板，取至少三个平板的平均值，每毫升样品中的细菌数=（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数；由于当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落，因此估算的菌落数少于实际菌落数．
3、微生物培养过程中要严格遵循无菌操作．

解答 解：（1）对大肠杆菌进行数量测定的实验常用的接种方法是稀释涂布平板法，即图中的A．
（2）分析选项可知，D选项中四个平板的每个平板的菌落数在30～300之间，且非常接近，因此D选项的结果最可靠．
（3）每毫升样品中的细菌数是═（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数=（43.4÷0.1）×10⁵=34.34×10⁷个．
（4）由于当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落，因此估算的菌落数少于实际菌落数．
（5）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，不能确定大肠杆菌品系被污染，也可能是培养基被污染或接种过程没有严格按照无菌技术进行操作或培养过程污染．
（6）105℃高温将微生物杀死，因此可以较长时间保存．
故答案为：
（1）A  稀释涂布平板法
（2）D
（3）4.34×10⁷
（4）少   当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落
（5）不能   因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程
（6）高温杀死了微生物

点评 本题旨在考查学生对微生物实验室培养技术的熟练掌握并应用相关知识解决实际问题的能力．