Question

5．脲酶是催化尿素分解的特异性水解酶．该酶主要从刀豆等豆科植物提取，现被广泛应用于尿素废水的净化过程．请分析回答以下问题：
（1）脲酶可以催化尿素分解为NH₃和C0₂，其中碱性物质可以能使酚红指示剂变为红色．
（2）为了提高脲酶的利用效率，可以采用固定化酶技术将其固定．酶的固定化方法有：吸附法、共价偶联法、包埋法和交联法．
（3）实验室中可以采用吸附法将该酶制成固定化酶柱，让尿素废水过柱前，先用10倍体积的蒸馏水洗涤酶柱，目的是除去未吸附的游离脲酶．
（4）脲酶除了从植物获取外，还可以来源于土壤中的微生物．为了从土壤中分离得到以尿素为氮源的微生物，采用的分离方法操作最简便的是划线分离法．下列有关该分离方法的操作叙述错误的是D．
A．必须使用固体培养基
B．必须在酒精灯火焰旁接种
C．必须将接种后的培养皿倒置培养
D．必须将接种前的培养皿、培养基、土壤悬浮液等进行灭菌处理．

Answer 1

分析 1、选择培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物
2、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素．
3、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）脲酶可以催化尿素分解为NH₃和C0₂，其中碱性物质可以能使酚红指示剂变为红色．
（2）酶的固定化方法有：吸附法、共价偶联法、包埋法和交联法．
（3）实验室中可以采用吸附法将该酶制成固定化酶柱，让尿素废水过柱前，先用10倍体积的蒸馏水洗涤酶柱，目的是除去未吸附的游离脲酶．
（4）分离微生物常用稀释涂布平板法和平板划线法，其中平板划线法是从土壤中分离得到以尿素为氮源的微生物的最简便的方法．采用平板划线法时，必须使用固体培养基；为了防止杂菌污染，必须在酒精灯火焰旁接种；配置培养基时，必须将接种后的培养皿倒置培养，防止皿盖上的水珠滴入培养基污染培养基；必须将接种前的培养皿、培养基等进行灭菌处理，对土壤悬浮液不能进行灭菌处理，否则会杀死目的菌．故选：D．
案为：
（1）NH₃和C0₂     红色
（2）交联法
（3）除去未吸附的游离脲酶
（4）划线分离法     D

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的两种方法及注意事项，掌握无菌技术等；识记分解尿素的微生物的分离原理及方法等，能结合所学的知识准确答题．