Question

7．如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的过程．图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点．据图回答：

（1）为确保目的基因的完整性及与载体连接的方向性，需用HindⅢ和BamHⅠ（填酶的名称）限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因，欲筛选出含有重组载体的大肠杆菌，需要在含氨苄青霉素的培养基上进行，能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的启动子．
（2）过程①采用的操作方法通常是显微注射技术，过程②代表的生物技术是胚胎移植．对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体，但胚胎发育到囊胚时，要确保内细胞团平均分割．
（3）为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用抗原-抗体杂交技术，对代孕牛的要求是同种、生理状况相同、健康体质和正常繁殖能力等．

Answer 1

分析 分析题图：图示是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，包括基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、早期胚胎培养、胚胎移植等步骤，其中过程①是将重组质粒导入受体细胞；过程②需采用胚胎移植技术．

解答 解：（1）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位点，其中限制酶SmaI的切割位点位于目的基因上，所以获取目的基因和构建基因表达载体时，应用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割质粒后，会破坏质粒上的四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行．启动子是能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列．
（2）过程①是将重组质粒导入受体细胞，当受体细胞是动物细胞时，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．过程②代表胚胎移植．对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体，但胚胎发育到囊胚时，要确保内细胞团平均分割．
（3）为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用抗原-抗体杂交技术，对代孕牛的要求是同种、生理状况相同、健康体质和正常繁殖能力等．
故答案为：
（1）HindⅢ和BamHⅠ氨苄青霉素     启动子
（2）显微注射技术      胚胎移植     内细胞团
（3）抗原-抗体杂交      同种、生理状况相同、健康体质和正常繁殖能力等

点评 本题结合乳腺生物反应器培育过程图，考查基因工程、胚胎工程等知识，要求考生识记基因工程的工具和操作步骤，能准确判断图中各过程的名称或采用的技术；识记胚胎分割技术的理论基础，能提取图中有效信息答题．