Question

6．请回答以下有关基因工程的问题．
（l）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸内切酶（限制酶）．DNA连接酶根据其来源不同，分为E?coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶
（2）利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便根据这一序列合成引物（引物对）
（3）基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤．启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，它能驱动基因转录出mRNA．
（4）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法
（5）要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用的方法是DNA分子杂交技术．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（l）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸内切酶，DNA连接酶根据其来源不同可分为E?coliDNA连接酶和 T₄DNA连接酶，E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T₄DNA连接酶来源于T₄噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端．
（2）利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便根据这一序列合成引物．
（3）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．基因表达载体中含有启动子和终止子，启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，它能驱动基因转录出mRNA．
（4）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法．
（5）常用DNA分子杂交技术检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶（限制酶）  E?coli DNA连接酶   T₄DNA连接酶
（2）引物（引物对）
（3）基因表达载体的构建       RNA聚合酶
（4）农杆菌转化法
（5）DNA分子杂交

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具及具体的操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合题中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．