Question

【题目】α-1抗胰蛋白酶（α-1—AT）是人类血浆中最重要的蛋白酶抑制剂，其主要作用是保护机体正常细胞和器官不受蛋白酶的损伤，抑制感染和炎症，维持机体内环境的平衡。下图是以基因工程技术获取重组α-1抗胰蛋白酶（HumanA1AT）的两种方法。回答下列问题：

（1）为获取α-1—AT基因，可采集人的血液，提取_____________合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增α-1—AT基因，该技术需要的酶是_______________。

（2）b过程中，可添加酚类化合物，其作用是______________。将α-1—AT基因导入大肠杆菌细胞时，可用____________处理细胞，使其变为感受态细胞。

（3）已知α-1抗胰蛋白酶需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。据此推导，方法_______（填“Ⅰ”或“Ⅱ”）具有优势，其优势是______________________。

（4）若要检测小麦胚乳细胞或大肠杆菌细胞中是否翻译出HumanA1AT，可用的检测物质是HumanA1AT的______（填“基因”或“抗体”）。

Answer 1

【答案】 总RNA（或mRNA） 热稳定DNA聚合酶（Taq酶） 吸引农杆菌移向小麦受体细胞，有利于α-1—AT基因转化成功 Ca2+ Ⅰ 小麦属于真核生物，具有膜系统，能对初始Human A1AT多肽进行高效加工 抗体

【解析】【试题分析】

本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤的相关细节，能结合所学的知识准确答题。

（1）总cDNA是以mRNA为模板逆转录合成的，所以需要提取人的总RNA或mRNA；PCR扩增的原理是DNA复制， 需要的酶是热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

（2）b过程表示农杆菌感染小麦受体细胞，酚类物质可吸引农杆菌移向小麦受体细胞，使农杆菌Ti质粒上的T－DNA转移到受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上，有利于目的基因成功转化；将α-1—AT基因导入大肠杆菌细胞时，可用Ca2+处理细胞，使其变为感受态细胞。

（3）由于大肠杆菌为原核生物，无生物膜系统，而小麦为真核生物，具有生物膜系统，故要获取α-1抗胰蛋白酶，选择方法Ⅰ具有优势，其优势是小麦属于真核生物，具有膜系统，能对初始Human A1AT多肽进行高效加工。

（4）若要检测小麦胚乳细胞或大肠杆菌细胞中是否翻译出HumanA1AT，可用抗原—抗体杂交技术，所以可用的检测物质是HumanA1AT的抗体。