Question

【题目】下图是转基因小鼠的培育过程示意图，是绿色荧光蛋白基因，请分析回答:

（1）过程①需要用到 酶。过程②将目的基因导人胚胎干细胞常用的方法是 。培养胚胎干细胞的培养液中除加人各种营养物质外，通常还需加入 。

（2）表达载体包含绿色荧光蛋白基因、 、 、终止子和复制原点等。

（3）自然状况下胚胎干细胞是由动物的早期胚胎或 中分离出来的一类细胞胚胎干细胞在形态上表现为体积小，细胞核大，细胞核仁明显;在功能上具有 性。

（4）图中载体上的基因是B抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418是B抗生素（对细胞有毒害作用），培养液添加G418的目的是 。

（5）图中步骤⑤要将细胞注射入囊胚的 位置;步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是 。

（6）检测目的基因是否翻译成蛋白质，可从小鼠c体内提取蛋白质，用 杂交的方法加以检测。

Answer 1

【答案】

（1）DNA连接酶 显微注射法 血清

（2）标记基因 启动子

（3）早期胚胎或原始性腺 发育的全能

（4）筛选出导入目的基因的胚胎干细胞

（5）内细胞团 同期发情处理

（6）抗原-抗体杂交

【解析】

（1）构建表达载体时，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组质粒，目的基因导人胚胎干细胞常用的方法是显微注射法，体外培养胚胎干细胞时，通常要加入血清等天然成分，除了保证被培养细胞处于无菌、无毒及充足氧气的环境中，还需要保证细胞生活所需适宜的温度和pH。

（2）表达载体包含目的基因（绿色荧光蛋白基因Gfp）、标记基因、启动子、终止子和复制原点等。

（3）胚胎干细胞来自于早期胚胎或原始性腺，早期胚胎或原始性腺属于全能性细胞。

（4）步骤③所用的G418是一种抗生素，其作用是筛选出导入目的基因的胚胎干细胞。

（5）囊胚包括滋养层细胞和内细胞团细胞，其中滋养层细胞将发育成胎盘和胎膜，而内细胞团细胞将发育成各种组织，因此图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的内细胞团位置；图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是同期发情处理。（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶 标记基因 启动子

（2）筛选出导入目的基因的胚胎干细胞

（3）早期胚胎或原始性腺

（4）内细胞团 同期发情处理

（5）抗原-抗体杂交

（6）从分子水平上检测小鼠是否存在绿色荧光蛋白，可采用抗原-抗体杂交法。