Question

CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB能跟核酸形成复合物，在高盐溶液(>0.7 mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在，当降低溶液中盐的浓度(<0.3 mol/L的NaCl溶液)时，CTAB－核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀，再用70%酒精浸泡可洗脱掉CTAB；氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下：

①在50 mL离心管中加入20 mL的CTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4 mol/L的NaCl、2%的CTAB)，于65℃水浴中预热；

②将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中，用液氮速冻并研磨成粉末，加入上述离心管中，于65℃水浴中保温30 min；

③取出离心管，冷却至室温，加入20 mL的氯仿，轻轻混匀20 min；

④在室温下以12000 r/min的转速离心10～20 min；

⑤将上清液移入另一个离心管中，加入2/3体积的经冷却的异丙醇，用玻璃棒轻轻搅动，小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB－核酸的复合物沉淀；

⑥将沉淀移入另一个离心管中，加入70%乙醇洗涤，重复洗涤1～2次；

⑦吹干乙醇后，将DNA溶于适量的TE缓冲液中，在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在核酸紫外检测仪上观察。

请回答下列问题：

(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法，常温下研磨时，植物细胞匀浆中含有的多种酶会对DNA的提取产生不利影响。用液氮速冻，材料在研磨时易破碎，同时还具有_______________________________。

(2)实验步骤③、④的目的是________________________________。

(3)实验步骤⑤中，玻璃棒上出现沉淀的主要原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是________，琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、________，使带电分子产生________而实现分离。DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，利用核酸紫外检测仪可以进行________。

 

Answer 1

(1)降低细胞匀浆中酶的活性，避免对DNA的提取产生不利的影响

(2)去除溶液中的蛋白质(使蛋白质变性和沉淀)

(3)NaCl溶液的浓度<0.3 mol/L，CTAB－核酸的复合物因溶解度降低而沉淀

(4)二苯胺　分子大小　形状的不同　不同的迁移速度　DNA含量的测定(或检测DNA)