Question

【题目】中国苦荞富含黄酮类化合物等营养物质，在降血糖、降血脂等方面功效显著．查尔酮合成酶（CHS）是黄酮类化合物合成的关键酶，如图为将修饰后的CHS基因导入苦荞，培育高产黄酮苦荞品系示意图．

（1）要对培养基彻底灭菌应采用的灭菌方法是__．接种前，用灭菌后未接种的培养基培养一段时间，观察是否形成菌落，目的是__．

（2）接种前，外植体用__和0.1%的氯化汞溶液进行消毒后都需经无菌水清洗．接种后2﹣5天，若发现外植体边缘局部污染，原因可能是__．

（3）过程②叫做__，通过②和③过程能成功地把离体的苦荞体细胞能培育成植株，此技术所利用的原理是__．

（4）判断转基因苦荞培育是否成功，可比较转基因苦荞与普通苦荞的黄酮类化合物含量，也可通过凝胶色谱法分离测定细胞中CHS含量，由于CHS__，所以最先从色谱柱中洗脱出来，工业化生产中，可利用__技术以提高CHS的利用率而节约成本．

Answer 1

【答案】 高压蒸汽灭菌 判断培养基灭菌是否彻底 70%的酒精 外植体消毒不彻底 脱分化 植物细胞的全能性 相对分子量大 固定化酶（固定化细胞）

【解析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定．其中构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，需要限制酶和DNA连接酶。植物组织培养技术包括脱分化和再分化两个重要过程，而决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要。

（1）培养基彻底灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法；为了判断培养基灭菌是否彻底，接种前应该用灭菌后未接种的培养基培养一段时间，观察是否形成菌落。

（2）外植体是植物组织培养的对象，应该用70%的酒精进行消毒；若接种后2-5天，发现外植体边缘局部污染，原因可能是外植体消毒不彻底。

（3）图中过程②表示脱分化形成愈伤组织的过程；③过程表示再分化，通过②和③过程将离体的苦荞体细胞培育成完整植株的技术是植物组织培养技术，该技术的原理是植物细胞的全能性。

（4）通过凝胶色谱法分离测定细胞中CHS含量时，由于CHS相对分子量大，所以最先从色谱柱中洗脱出来；工业化生产中，可利用固定化酶（或固定化细胞）技术以提高CHS的利用率而节约成本。