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20.如图为吉林大学农学部奶牛繁育基地成功培育出的一头携带转人赖氨酸基因的克隆牛“织女”的大致过程,请据图回答问题.

(1)克隆牛“织女”的诞生过程中涉及到的细胞水平的现代生物技术主要有:核移植技术、动物细胞培养、胚胎移植 (至少答出两项)
(2)实施基因工程包括四个基本操作步骤,其核心步骤是基因表达载体的构建,实现②过程的常用方法是显微注射法
(3)现有-长度为1000碱基对(by)的DNA分子,用限酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是1000by,说明此DNA分子为环状 (填“线性”或“环状”),用Kpn I单独酶切得到400by和600by两种长度的DNA分子,用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200by和600by两种长度的DNA分子.请绘出该DNA分子的酶切图谱的示意图: (请在图中标明限制酶的类型、酶切位点和碱基长度).

分析 分析题图:①是取自黑白奶牛的成纤维细胞;②表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞;③是采用胰蛋白酶处理后得到的单个细胞;④表示囊胚;⑤表示胚胎分割技术;⑥表示胚胎移植过程;⑦表示妊娠产生转人赖氨酸基因的克隆牛“织女”.

解答 解:(1)从图示可看出该流程涉及的生物技术有:核移植技术、动物细胞培养,早期胚胎培养、胚胎移植.
(2)基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建,②表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞.
(3)用限制性核酸内切酶EcoR1酶切后得到的DNA分子仍是1000by,由此可推知该DNA分子为环状DNA;用Kpnl单独酶切会得到600by和400by两种长度的DNA分子和用EcoRI,Kpnl同时酶切后得到200by和600by两种长度的DNA分子,如图:

故答案为:
(1)核移植技术、动物细胞培养、胚胎移植    
(2)基因表达载体的构建显微注射法
(3)环状  

点评 本题考查胚胎工程相关知识,意在考查学生是否理解实验方法和操作步骤,能否把所学知识的要点,知识间的内在联系,形成知识的网络结构;关注科学、技术在社会发展中的作用.

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(二)实验步骤:
①取洁净的培养皿一个,加入适量的培养液.
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④分别从5支试管吸取适量的培养液,在显微镜下观察计数,记录数据.
⑤从培养皿中吸取等量的培养液置于1-5号试管中,振荡后,在冰箱中培养一段时间.
⑥从静置的5支试管中吸取适量的培养液,在显微镜下观察计数,记录数据.
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(2)第②步中所用的“某种酶”是指胰蛋白(或胶原蛋白)酶.上述细胞培养液中必须包含细胞生长所需的营养物质,如:糖类、氨基酸、无机盐、水、血清(至少写出三种)等.
(3)这位同学在操作上存在两处错误,请指出并指正:
a.步骤⑤在“冰箱中”应该为在“适宜温度下”或“在恒温箱中”;
b.步骤⑥“从静置的”应改为“振荡摇匀后”.
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 实验组别 1 2 3 4 5
 二氯二乙胺浓度(mg/mL) 0.1 0.2 0.3 0.4 0
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