Question

下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度。请据图回答：

（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是     、     。
（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到     酶。如果是两两重组，可能有     种长度的重组结果。
（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用     酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和      kb，或者     kb和     kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。

Answer 1

（1）缺少标记基因   复制原点被限制酶切割
（2）限制酶（PvuⅠ）和DNA连接酶   3
（3）EcoRⅠ   5.6    3.1    3.6

解析试题分析：
（1）分析题图可以发现，要想构建基因表达载体，必须使用限制酶PvuⅠ对于目的基因进行切割，质粒A中没有标记基因，质粒C中限制酶PvuⅠ的切割部位在复制圆点内部，会破坏质粒的功能。
（2）分析题图可以推知，构建基因表达载体时，需要的酶有限制酶（PvuⅠ）和DNA连接酶；若只考虑两两重组，切割完有2段长度不同的DNA片段，故重组结果有3种情况：自身重组和两种DNA片段重组。
（3）根据题意，目的基因中除了有限制酶（PvuⅠ）的切点外，还存在一种限制酶EcoRⅠ的切割位点，由于目的基因长度为4.0，故若用限制酶PvuⅠ切割后得不到1.1kb的片段，故应用限制酶EcoRⅠ进行切割，一种情况是可以得到1.1kb的一段和5.6kb的一段，另一种情况是目的基因反过来插入，则可以得到3.1kb的一段和3.6kb的一段。
考点：本题考查基因工程的有关知识，意在考查考生识图能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。