Question

生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M（单细胞）产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如图1）．

（1）筛选产脂肪酶的微生物M时，应用

 

培养基，可以在培养基中添加

 

作为唯一碳源．
培养基灭菌采用的最适方法是

 

法．
（2）图2是采用纯化微生物M培养的两种接种方法接种后培养的效果图，则获得图A效果的接种方法是

 

，图B效果的接种方法是

 

．接种后应注意培养基要

 

放置．
（3）若需人工大量克隆脂肪酶基因，可应用

 

技术，该过程需要的特殊酶是

 

．
（4）获得微生物M以后，若要用于生产，还需要进行扩大培养，培养后若想计算微生物M的密度，一般用

 

法进行计数．微生物M产生的脂肪酶可以用

 

试剂进行检测．

Answer 1

考点：培养基对微生物的选择作用,微生物的分离和培养,测定某种微生物的数量

专题：

分析：筛选分离目的菌时应该使用只有目的菌能够生存的，其他微生物不能生存的选择培养基，培养基制作完成后应该进行高压蒸汽灭菌．常用的固体培养基上接种的方法是稀释涂布平板法和平板划线法．人工大量克隆脂肪酶基因可以用PCR技术．

解答： 解：（1）筛选产脂肪酶的微生物M时，应该使用只有目的菌能够生存的，其他微生物不能生存的选择培养基，培养基中应该添加植物油作为唯一碳源．
（2）据图分析：图A的接种方法是稀释涂布平板法，图B的接种方法是平板划线法，为防止接种后水蒸气凝集呈水滴滴入培养基而污染，需要将培养皿倒置．
（3）在应用PCR技术扩增DNA片段时，DNA合成（延伸）时温度要控制在72℃，需要具有较强的耐热性的DNA聚合酶催化．
（4）计算微生物M的密度，一般用显微计数法（血球计数法）法进行计数，脂肪酶的本质是蛋白质，可以用双缩脲检测．
故答案为：
（1）选择   植物油   高压蒸汽灭菌   
（2）稀释涂布平板法   平板划线法   倒置
（3）PCR   耐热DNA聚合酶    
（4）显微计数法（血球计数法）   双缩脲

点评：本题主要考查微生物的筛选分离和PCR技术，意在强化相关知识点的识记与理解．