Question

【题目】下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的过程。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：

（1）为确保目的基因的完整性及与载体连接的方向性，需用___________(填酶的名称）限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因，欲筛选出含有重组载体的大肠杆菌，需要在含_____________的培养基上进行，能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的_____________________。

（2）过程①采用的操作方法通常是________________，过程②代表的生物技术是__________。对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体，但胚胎发育到囊胚时，要确保_____________平均分割。

（3）为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用________技术，对代孕牛的要求是___________。

Answer 1

【答案】 HindⅢ和BamHⅠ 氨苄青霉素 启动子 显微注射技术 胚胎移植 内细胞团 抗原-抗体杂交 同种、生理状况相同、健康体质和正常繁殖能力

【解析】试题分析：本题以图文结合的形式考查学生对基因工程的基本操作程序、胚胎移植、胚胎分割的识记和理解能力。解答此题的关键是熟记并理解相关的基础知识、形成清晰的知识网络。在此基础上，依据图示中限制酶切割位点的位置等信息，准确定位数字所示过程的含义并结合题意作答。

(1) 图中信息显示：人乳铁蛋白基因的两端和载体上都有BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点，因此将人乳铁蛋白基因插入载体，需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。因人乳铁蛋白基因的插入，使得重组载体中的四环素抗性基因（tetR）遭到破坏，但氨苄青霉素抗性基因（ampR）结构完好，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌，需要在含氨苄青霉的培养基上进行。启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA，据此可知：能驱动人乳铁蛋白基因的乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的启动子。

(2) 过程①是将重组载体导入供体牛的受精卵中，采用的操作方法通常是显微注射技术。过程②是将早期胚胎移入受体，采用的生物技术是胚胎移植。采用胚胎分割技术对发育到囊胚时期的胚胎进行切割时，要确保内细胞团平均分割。

(3) 人乳铁蛋白基因是目的基因，检测目的基因是否成功表达，可采用抗原—抗体杂交技术。在胚胎移植时，对受体（代孕牛）的要求是同种、生理状况相同、有健康的体质和正常繁殖能力。