Question

【题目】【生物——选修3：现代生物科技专题】

屠呦呦获得诺贝尔生理学奖后，最新研究表明，青蒿素还可用于糖尿病的治疗。研究人员利用基因工程培育出高产的转基因青蒿。

（1）青蒿的cDNA文库，是以从青蒿细胞中提取的_____________为模板，通过_____________（方法）建立，该文库中的基因_____________（填“含有”或“不含有”）启动子。

（2）基因工程操作的核心步骤是__________。若选择的限制酶切出的DNA片段是平末端，应选择__________进行连接。

（3）目的基因的大量扩增可以采用____________技术，该技术的原理是____________，该技术中需使用一种特殊的酶是____________。

Answer 1

【答案】 mRNA 反转录 不含有 基因表达载体的构建 T4-DNA连接酶 PCR DNA（双链）复制 热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）

【解析】试题分析：基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）cDNA文库是以mRNA为模板，通过反转录法建立的；由于启动子和终止子不能转录形成mRNA，因此以mRNA为模板逆转录形成的cDNA中不含有启动子、终止子等结构。

（2）基因工程操作的核心步骤是基因表达载体的构建；根据酶的来源不同，DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶、T4DNA连接酶，这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。

（3）PCR技术可在体外大量扩增目的基因，其原理是DNA复制。PCR在较高温度下进行，因此该技术中需使用一种特殊的酶是热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）。