Question

14．土壤微生物分离培养技术在微生物环境功能研究、代谢途径的阐明、特定功能的验证等方面发挥着重要作用．研究者可以通过培养基的优化和重新设计来达到分离土壤微生物的目的．以土壤中分解尿素的细菌的分离与计数为例，回答下列问题：
（1）为达到分离的目的，培养基的成分必须以尿素为唯一氮源．制作固体培养基时需加入琼脂作为凝固剂．为方便计数，可用稀释涂布平板法接种．
（2）在使用同一土壤样品和培养基已灭菌的情况下，甲同学从对应10⁴倍稀释的培养基中筛选出约200个菌落，而其他同学筛选出约50个菌落，请分析甲同学筛选出菌落较多的原因：杂菌污染、无菌操作不当．（写出两个原因）．
（3）在细菌分解尿素的反应中，细菌产生的脲酶可将尿素分解成为氨．为进一步分离得到的细菌是否可以分解尿素，可在培养基中加入酚红指示剂，若该指示剂变红，则可初步鉴定该细菌可以分解尿素．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：
（1）实验室中目的菌株的筛选
①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度．pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长．
培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素．配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌．

解答 解：（1）要从土壤中分解尿素的细菌，培养基的成分必须以尿素为唯一氮源．制作固体培养基时需加入琼脂作为凝固剂．为方便计数，可用稀释涂布平板法接种．
（2）在使用同一土壤样品和培养基已灭菌的情况下，甲同学从对应10⁴倍稀释的培养基中筛选出约200个菌落，而其他同学筛选出约50个菌落，则甲同学筛选出菌落较多的原因可能是杂菌污染、无菌操作不当等．
（3）在细菌分解尿素的反应中，细菌产生的脲酶可将尿素分解成为氨．为进一步分离得到的细菌是否可以分解尿素，可在培养基中加入酚红指示剂，若该指示剂变红，则可初步鉴定该细菌可以分解尿素．
故答案为：
（1）唯一氮源     琼脂     稀释涂布平板
（2）杂菌污染、无菌操作不当
（3）脲    酚红     变红

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养的成分、种类及功能；识记接种微生物常用的两种方法；识记分离分解尿素的细菌的原理，能结合所学的知识准确答题．