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    【题目】农作物秸秆中的纤维素阻碍了堆肥技术固体废物领域的发展。为提高堆肥品质，科研人员探究了温度对纤维素分解菌分解能力的影响，实验步骤如下：①纤维素分解菌的筛选、分离及纯化→②纤维素分解菌菌株数量测定→③纤维素酶活力测定和降解滤纸能力的检测。请回答下列问题：

    （1）步骤①中，若用稀释涂布平扳法接种，则必须将菌液进行一系列的____________。

    （2）步骤②中，在条件适宜的环境下培养细菌10d后，用____________（填—种实验用具）在显微镜下可计算细菌数量。此方法中的“条件”至少包括：适宜温度、以____________作为唯一碳源的____________（填“固态”、“半固态”或“液态”）培养基等，可用台盼蓝染液鉴定视野中细菌是否死亡，原理是____________。

    （3）步骤③中，酶活力可用培养基上菌落直径及____________来表示。

    【答案】梯度稀释 血细胞计数板 纤维素 液态 活细菌的细胞膜具有选择透过性，不会被台盼蓝染色 菌落周围透明圈大小

    【解析】

    ①液体培养基是扩大培养的常用手段。利用稀释涂布平板法接种微生物，经过培养可获得单菌落，便于计数。稀释涂布平板法是指将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。②筛选纤维素分解菌需使用以纤维素作为唯一碳源的选择培养基，可用刚果红染色法进行筛选，其原理是：刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维素水解后形成的纤维二糖和葡萄糖发生颜色反应；当纤维素被纤维素酶水解后，刚果红-纤维素复合物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。③活细胞的细胞膜对物质进出细胞具有选择透过性，可以阻止活细胞不需要的台盼蓝染色剂进入，因此活细胞不能被台盼蓝染成蓝色；当细胞死亡后，细胞膜的选择透过性丧失，台盼蓝染色剂才能进入细胞。

    (1) 步骤①中，若用稀释涂布平扳法接种，则必须将菌液进行一系列的梯度稀释。

    (2)对于细菌的计数，可用血细胞计数板在显微镜下计算细菌数量。液态培养基有利于获得大量菌体，对纤维素分解菌的菌株数量进行测定，需要提供有利于纤维素分解菌生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长，所以其培养条件包括：适宜温度、以纤维素作为唯一碳源的液态培养基等。由于活细菌的细胞膜具有选择透过性，不会被台盼蓝染色，因此可用台盼蓝染液鉴定视野中细菌是否死亡。

    (3) 纤维素分解菌产生的纤维素酶可将培养基中的纤维素分解，导致菌落的周围出现透明圈，而且透明圈越大，说明纤维素分解菌产生的纤维素酶的活性越强，对纤维素的分解和利用越快，细菌繁殖的越多。可见，步骤③中，酶活力可用培养基上菌落直径及菌落周围透明圈的大小来表示。

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    实验组

    实验一

    实验二

    编号

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

    9

    10

    蔗糖酶浓度

    0%

    1%

    2%

    4%

    5%

    2%

    2%

    2%

    2%

    2%

    蔗糖浓度

    10%

    10%

    10%

    10%

    10%

    0%

    5%

    10%

    20%

    30%

    相对反应速度

    0

    25

    50

    100

    200

    0

    25

    50

    65

    65

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