Question

【题目】生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：

KH2PO4 Na2HP04 MgS047H20	1.4g 2.1g 0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
琼脂	15g
溶解后自来水定容到1000mL

（1）分解尿素的细菌能分泌____________酶，能将尿素分解成_______________。培养基中加入尿素的目的是________________。

（2）培养基中为“目的菌”生长提供氮源和碳源的物质分别来自__________和________。实验需要振荡培养，原因是______________。转为固体培养时，常采用___________法接种，获得单菌落后继续筛选。

（3）在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻璃棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中液体。其中需要灭菌的是_____________(填序号）。

（4）分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有__________(填序号）。

①取样不同 ②培养基污染 ③操作失误 ④没有设置对照

（5）以尿素为唯一氮源的培养“目的菌”后，加入________指标剂后变红，说明“目的菌”能分解尿素。

（6）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养2448h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果见表，其中___________倍的稀释比较合适。

稀释倍数	103	104	105	106	107
菌落数	>500	367	248	36	18

Answer 1

【答案】 脲酶 氨 筛选目的菌 尿素 葡萄糖 为目的菌提供氧气 稀释涂布平板 ①和② ①②③ 酚红 106或105

【解析】试题分析：本题是对用于微生物培养的培养基的配方及营养成分、选择培养基的选择作用、常用的接种方法、无菌操作技术、对分解尿素的菌的鉴定等相关知识的综合性考查，回忆微生物培养的培养基的配方和营养成分、选择培养基的选择作用、常用的接种方法的具体操作和目的、无菌操作技术、对分解尿素菌的鉴定等知识点，然后结合问题进行解答。

（1）分解尿素的细菌能分泌脲酶，能将尿素分解成氨。该实验的目的是筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌），在培养基中加入尿素后，能高效降解尿素的细菌（目的菌）能够生长繁殖，不能分解尿素的细菌无法生长繁殖。

（2）目的菌生长繁殖需要的氮源来自尿素，碳源来自葡萄糖；由于分解尿素的菌是需氧微生物，因此需要震荡培养，为目的菌提供氧气。转为固体培养时，常采用稀释涂布平板法接种，获得单菌落后继续筛选。

（3）为了保证培养物不被污染，对培养细菌用的培养基与培养皿和玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管要进行灭菌，瘤胃中液体要进行消毒。

（4））由题意知，该同学与其他同学获得的菌落数差异很大，可能的原因是取样不同，培养基被污染；或者是实验过程中操作失误。

（5）尿素被分解尿素的细菌分解为氨，氨会使培养基碱性增强，pH升高，指示剂酚红变红，因此在培养基中加入酚红指示剂，检测培养基pH的变化来判断尿素是否被分解。

（6）观察并统计菌落数应选30-300之间的培养皿进行统计，故应选106或105倍的稀释比较合适。