Question

红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O₂或CO₂，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：

(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步；________、________、________和________。

(2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。

①加入柠檬酸钠的目的是____________________________________。

②在样品处理中包括红细胞的洗涤、____________、分离血红蛋白溶液、透析。

③洗涤红细胞的目的是____________，你如何知道红细胞已洗涤干净？ ______________________。

④分离红细胞时对离心速度和离心时间的要求是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

⑤若离心速度过高和时间过长，结果会怎样？________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析，这就是样品的粗分离。

①透析的目的是__________________________________________________________

________________________________________________________________________。

②透析的原理是_________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。

①样品纯化的目的是______________________________________________________

________________________________________________________________________。

②血红蛋白有什么特点？_________________________________________________

________________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？________________________________________________________________________

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Answer 1

(1)样品处理　粗分离　纯化　纯度鉴定　(2)①防止血液凝固　②血红蛋白的释放　③去除杂蛋白　离心后的上清液没有黄色　④低速短时间离心，如500 r/min离心2 min　⑤离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度　(3)①去除相对分子量较小的杂质　②透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内　(4)①通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去　②血红蛋白呈现红色　在凝胶色谱分离时可通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液，这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作

 

分离提取血红蛋白的实验流程大致是：样品处理—粗分离—纯化—纯度鉴定四个步骤。柠檬酸钠属于抗凝剂。血红蛋白是红色含铁的蛋白质。凝胶色谱法分离蛋白质是依据蛋白质的相对分子质量大小来进行的。