Question

【题目】如图是制备抗埃博拉病毒(EBOV)VP40蛋白单克隆抗体的过程，请据图回答问题：

(1)通过PCR技术获取目的基因的过程中，反应体系中除了加入含有EBOV VP40基因的DNA、dNTP，还应该有___________酶和根据目的基因的核苷酸序列设计的_____________。

(2)选用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切的优点是____________________________。

(3)大肠杆菌获得重组质粒A，从而发生稳定遗传变化的过程可称为________。该过程首先需要用________处理大肠杆菌，使其更易吸收环境中的DNA分子。

(4)过程⑥常用的不同于诱导植物原生质体融合的方法是用___________处理，该过程能产生的两两融合的细胞有_______种。若把在HAT选择培养基上存活的细胞全部培养在同一培养基中，从中提取出的抗体_________(填“是”或“不是”)单克隆抗体。

(5)体内培养是指把能产生特异性抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内进行培养，一段时间后，从__________中提取单克隆抗体。图示过程应用了哪些生物技术：__________________________。

Answer 1

【答案】Taq(热稳定的DNA聚合) 引物 防止酶切产物之间的随意连接，提高连接成功率(其他合理答案也可) 转化 Ca2+ 灭活的病毒 3 不是 腹水 基因工程、动物细胞培养、动物细胞融合

【解析】

1、图示过程中，①为获取目的基因，②为形成重组质粒，③为目的基因的导入，④为获取相应的蛋白质，⑤为注射入B淋巴细胞，⑥为形成杂交瘤细胞，⑦为获取单克隆抗体。

2、PCR技术的过程：高温变性、低温复性、中温延伸，条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。

3、获得目的基因的方法：①从基因文库中获取②利用PCR技术扩增③人工合成 (化学合成)。原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。

4、DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶(限制酶) 、DNA连接酶、运载体.

5、动物细胞融合原理是：细胞增殖、细胞膜的流动性；细胞融合的方法有：物理法：离心、振动、电激；化学法：聚乙二醇；生物法：灭活的病毒(灭活的仙台病毒) 。最广泛的应用是：制备单克隆抗体，一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。

(1)PCR扩增目的基因需要热稳定的DNA聚合酶和引物。

(2)EcoRⅠ和XhoⅠ切割形成的黏性末端不同，而DNA连接酶只能将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来，因此为了防止目的基因反向连接或自身环化，酶切时可同时选用EcoRⅠ和XhoⅠ，提高连接成功率。

(3)大肠杆菌获得重组质粒，从而发生稳定遗传变化的过程可称为转化，将目的基因导入细菌的过程中首先需要用Ca2+处理大肠杆菌，使其更易吸收环境中的DNA分子。

(4)不同于诱导植物原生质体融合的诱导动物细胞融合的方法是用灭活的病毒处理。两种细胞(分别用A细胞、B细胞表示)两两融合得到A—A、A—B、B—B三种融合细胞，选择培养基上的杂交瘤细胞可产生多种抗体，因此产生的抗体不是单克隆抗体。

(5)将能产生特异性抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内进行培养，一段时间后，可从腹水中提取单克隆抗体。题图示过程应用了基因工程、动物细胞培养、动物细胞融合等生物技术。