Question

4．Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的细胞核．
（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团分离出ES细胞．
（3）步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体．可以根据Rag₂基因的核苷酸序列设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点．
（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验．

Answer 1

分析 分析题图：图示是利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗的过程图解，其中①表示核移植过程，②表示早期胚胎培养过程，③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞．

解答 解：（1）核移植是指将体细胞核移植到去核卵母细胞中，因此①核移植过程中，在核移植前应去除卵母细胞的细胞核．
（2）内细胞团位于囊胚中，所以步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团分离出ES细胞．
（3）步骤③中，根据Rag₂基因的核苷酸序列设计引物并扩增Rag₂基因片段．基因工程中构建基因表达载体时，应用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，若用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段，则为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点．
（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可采用抗原-抗体杂交法，即提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质（抗原），用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验．
故答案为：
（1）细胞核  
（2）囊胚  
（3）核苷酸序列　HindⅢ和PstⅠ
（4）蛋白质

点评 本题结合图解，综合考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题；识记核移植的具体过程；识记体外受精的具体过程及早期胚胎发育的过程，能结合所学的知识准确答题．