Question

14．图1为单克隆抗体制备流程示意图，图2为生产破伤风杆菌抗体的实验方案．请据图回答问题．

（1）动物细胞培养技术是单克隆抗体技术的基础．通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是血清可以补充合成培养基中缺乏的物质．细胞培养应在含5%CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的作用是维持培养液pH．
（2）图1中细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是筛选杂交瘤细胞．
（3）图1中为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7-10个细胞/mL，每孔滴入0.1mL细胞稀释液，其目的是使每个小孔内不多于一个细胞，达到制备单克隆培养的目的．
（4）图2中②过程，常用灭活的病毒作为诱导剂．选出的细胞具备无限增殖、能分泌特异性抗体特点．
（5）图2该方案能达到预期效果吗？不能．原因是没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞．
（6）已知癌细胞X基因过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对癌细胞X基因表达量的影响，可将甲细胞分为甲、乙两组，甲组细胞培养液中加入等量的药物Y，乙组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从甲、乙两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在甲、乙两组细胞中的mRNA或蛋白质合成水平的差异，确定Y的药效．

Answer 1

分析 据图1分析，将特定的抗原注射小鼠，筛选出产生抗体的淋巴细胞；与骨髓瘤细胞融合，转移到HAT培养基中培养，未融合的细胞死亡，而杂交瘤细胞存活；杂交瘤细胞分开培养，选育出产生高特异性抗体的细胞．
据图2分析，①过程获取B淋巴细胞；②过程是诱导细胞融合，筛选出杂交瘤细胞；③过程是细胞培养，④过程筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞，⑤过程是通过小鼠腹腔中培养获得大量的单克隆抗体或培养液中培养获得大量的单克隆抗体．

解答 解：（1））动物细胞培养技术是单克隆抗体技术的基础．通常在合成培养基中加入适量血清，原因是血清可以补充合成培养基中缺乏的物质，细胞培养应在含5%CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的作用是维持培养液pH．
（2）据图分析，骨髓瘤细胞在HAT培养基上无法生长，所以骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞也不能在该培养基上存活；淋巴细胞和淋巴细胞自身融合的细胞能在HAT培养基上正常生活，但不能增殖，所以经过培养后，HAT培养基上没有淋巴细胞和淋巴细胞自身融合的细胞；骨髓瘤细胞与淋巴细胞之间形成的杂交瘤细胞能在HAT培养基上正常生活，并无限增殖．故HAT培养基培养目的是：筛选杂交瘤细胞．
（3）为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）．
（4）植物细胞原生质体融合常用物理法和化学法诱导剂，动物细胞融合还可以采用灭活的病毒．选出的细胞具备无限增殖、能分泌特异性抗体的特点．
（5）图2 方案没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞．
（6）该实验的目的是试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，因此自变量为是否加入Y，乙组细胞培养液中加入等量无菌生理盐水，则甲组细胞培养液中应加入等量Y．已知基因X表达与肝肿瘤的发生密切相关，而基因X的表达包括转录和翻译两个步骤，抗癌药物Y的作用可能是抑制基因X的转录过程，也可能是抑制其翻译过程，因此通过分别检测基因X在甲、乙两组细胞中的mRNA或相关蛋白质合成水平的差异，可以确定Y的药效．
故答案为：
（1）血清可以补充合成培养基中缺乏的物质   维持培养液pH
（2）筛选杂交瘤细胞
（3）使每个小孔内不多于一个细胞，达到制备单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体纯度）
（4）灭活的病毒      无限增殖、能分泌特异性抗体
（5）不能  没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞
（6）等量的药物Y        mRNA       蛋白质

点评 本题以单克隆抗体制备流程阶段示意图为载体，考查单克隆抗体制备的过程，动物细胞培养的条件，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断，难度适中．