Question

8．埃博拉出血热是一种由埃博拉病毒引起的急性传染病，建立良好特异性的检测方法非常重要．埃博拉病毒核蛋白NP具有很强的抗原性，是诊断研究的重要靶点．
（1）鼠源抗NP蛋白的单克隆杭体，由鼠杂交瘤细胞分泌，抗体结构如图1所示，抗体通过可变区与抗原特异性结合．从鼠杂交瘤细胞中提取RNA，逆转录合成cDNA，利用PCR技术扩增鼠源抗体可变区对应的DNA片段．
使用限制酶和DNA连接酶将鼠源抗体可变区对应的DNA片段与能表达人源抗体恒定区部分的载体重组，导入人胚肾上皮细胞，从细胞培养液中获取人-鼠嵌合抗体．临床使用人-鼠嵌合抗体的优点是降低免疫排斥反应．
（2）提取埃博拉病毒的蛋白质进行电泳，并运用抗原-抗体杂交，检测人-鼠嵌合抗体的特异性．实验主要步骤如图2所示，其中一抗能与相应抗原特异性结合，二抗能与相应一抗特异性结合．

注：1、2为电泳泳道，其中1为蛋白质分子量标准，2为提取的埃博拉病毒蛋白质；标记二抗的AP能在显色液中显色．A、B、C为不同一抗、二抗处理后的三组实验结果．

组別	一抗来源	二抗来源	结果
①	人-鼠嵌合抗体	AP标记的抗人抗体	Ⅰ
②	鼠杂交瘤细胞上清液	AP标记的抗鼠抗体	Ⅱ
③	普通人胚肾上皮细胞培养液	AP标记的抗人抗体	Ⅲ

实验记录如上表，AP标记的抗人抗体能与嵌合抗体中的人源恒定区结合，AP标记的抗鼠抗体能与鼠源抗体结合．若表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ依次对应结果分析中的A、B、C（一种方案即可），则表明该人-鼠嵌合抗体能用于埃博拉出血热的应急血清学检测．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术（全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术）扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）逆转录是指以RNA为模板合成cDNA，因此需要从鼠杂交瘤细胞中提取RNA．体外扩增鼠源抗体可变区对应的DNA片段利用PCR 技术．构建重组DNA分子（基因表达载体）需要用同一种限制酶切割运载体和目的基因，之后用DNA连接酶连接．在基因水平上对抗体进行重组，将鼠源抗体可变区对应的DNA片段与能表达人源抗体恒定区部分的载体重组，导入人胚肾上皮细胞，从细胞培养液中获取人恒定区-鼠可变区嵌合抗体，即人-鼠嵌合抗体．临床使用人-鼠嵌合抗体对人体的不良反应减少，即优点是降低免疫排斥反应．
（2）根据题意和图示分析可知：不同一抗、二抗处理后的三组实验结果中，只有A、B中标记二抗的AP能在显色液中显色，说明含有相应抗原；而C中标记二抗的AP不能在显色液中显色，说明不含有相应抗原，即来源于普通人胚肾上皮细胞培养液．因此，表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ依次对应结果分析中的A、B、C，则表明该人-鼠嵌合抗体能用于埃博拉出血热的应急血清学检测．
故答案为：
（1）RNA    PCR   限制酶和DNA连接酶     鼠      人  降低免疫排斥反应
（2）A     B          C

点评 本题考查基因工程和单克隆杭体的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤中，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．