Question

19．人血清白蛋白是一种在医学上应用广泛、需求量大的蛋白质药物．而目前血浆提取生产的方式难以满足市场的要求，用基因工程方法生产人血清白蛋白无疑具有巨大的商业价值．毕赤酵母菌由于具有增殖快、易培养等优点，使得其在表达外源蛋白中具有突出的优势．
（1）若从cDNA文库获取人血清白蛋白基因，则需要从能够表达人血清白蛋白基因的细胞中提取mnRNA分子，再通过反转录过程获得cDNA文摩，从中获得目的基因；在构建基因表达载体时，目的基因前后还应分别加上启动子和终止子，否则会影响目的基因的转录．
（2）目的基因导入酵母菌之前，一般先用钙离子处理酵母菌使之成为感受态细胞，其原因是感受态细胞能够吸收周围环境中DNA分子．
（3）人血清白蛋白基因进入酵母细胞内，能够维持稳定和表达的过程称为转化；若要检测酵母菌细
胞内是否存在目的基因，通常采用的检测方法是DNA分子杂交技术：要检测酵母菌是否生产人
血清白蛋白，采用抗原一抗体杂交，若有杂交带出现，表明已表达出人血清白蛋白．

Answer 1

分析 1、将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用 Ca²⁺处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程．
2、目的基因的检测和鉴定：
（1）分子水平上的检测  
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术
②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术
③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）若从cDNA文库获取人血清白蛋白基因，则需要从能够表达人血清白蛋白基因的细胞中提取mRNA分子，再通过反转录过程获得cDNA文库，从中获得目的基因；在构建基因表达载体时，目的基因前后还应分别加上启动子和终止子，否则会影响目的基因的转录．
（2）目的基因导入酵母菌之前，一般先用钙离子处理酵母菌使之成为感受态细胞，其原因是感受态细胞能够吸收周围环境中DNA分子．
（3）转化是指目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程．若要检测酵母菌细胞内是否存在目的基因，通常采用的检测方法是DNA分子杂交技术：要检测酵母菌是否生产人血清白蛋白，采用抗原一抗体杂交，若有杂交带出现，表明已表达出人血清白蛋白．
故答案为：
（1）反转录   启动子   终止子
（2）钙离子     吸收周围环境中DNA分子
（3）转化    DNA分子杂交   杂交带

点评 本题考查了基因工程的有关知识，要求考生能够识掌握因工程的操作步骤，识记基因表达载体的组成以及其中启动子和终止子的作用，识记目的基因导入微生物细胞的方法，掌握目的基因检测与鉴定的方法．