Question

【题目】请回答下列问题

（1）为了从土壤中筛选能有效降解有害有机化合物A的细菌，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌（目的菌），从功能看该培养基为____________培养基，在对该菌进行分离、纯化、计数过程中，常采用________法接种。实验过程中还需配制空白培养基作为对照，如果空白培养基中无菌落形成而实验组培养基中形成的菌落如图所示，造成这种结果的原因可能是______ 。

（2）用稀释涂布平板法统计菌落数目时，最好选择群落在30-300的平板进行计数。若统计出在一稀释倍数为105的平板上的平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0.2mL，则每毫升样品中的细菌数为________________________。菌落是指________________________

（3）某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。在用该材料提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题，你将如何解决这一问题?______________。在果汁生产中，为了提高果胶酶的使用效率和产品纯度，一般需要将酶用______________法进行固定化处理。

（4）用凝胶色谱法提取分离血红蛋白时，用_______________洗涤红细胞，用_________破裂红细胞使血红蛋白得以释放，如果装填的凝胶色谱柱中出现气泡，气泡会_________，降低分离效果。

Answer 1

【答案】选择 稀释涂布平板 土壤中含有4种能降解有机物A的细菌或培养基不纯含有其他碳源和氮源或接种过程被杂菌感染 1.5107 由单固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成以母细胞为中心的个微生物细胞在适宜肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞集团 在浑浊和有沉淀的汁液中加入果胶酶和淀粉酶 化学结合法或物理吸附法 生理盐水 蒸馏水和甲苯 搅乱蛋白质的洗脱次序

【解析】

1、实验室中目的菌株的筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等) ,同时抑制或阻止其他微生物生长。

2、微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在保温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

3、凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量较大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快。

(1)只有能利用化合物A微生物才能在该培养基上生存，因此该培养基为选择培养基，其能成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌(目的菌)；接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可对微生物进行计数，因此在分离、纯化、计数过程中，常采用稀释涂布法接种；如果空白培养基中无菌落形成而实验组培养基中形成的菌落如图所示，造成这种结果的原因可能是土壤中含有4种能降解有机化合物A的细菌或培养基不纯，含有其他碳源和氮源或接种过程中被杂菌污染。

(2)用稀释涂布平板法统计菌落数目时，最好选择群落在30-300的平板进行计数。若统计出在一稀释倍数为105的平板上的平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0.2mL，则每毫升样品中的细菌数为30÷0.2×105= 1.5107个。菌落是指由单固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成以母细胞为中心的个微生物细胞在适宜肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞集团。

(3)某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。在用该材料提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题，这是由果胶和淀粉造成的，则可在浑浊和有沉淀的汁液中加入果胶酶和淀粉酶，固定化方法包括包埋法、化学结合法和物理吸附法，由于酶分子比较小，容易从包埋材料中漏出，因此固定化酶一般采用化学结合法和物理吸附法。

（4）用凝胶色谱法提取分离血红蛋白时，用生理盐水洗涤红细胞，用蒸馏水和甲苯破裂红细抱胞使血红蛋白得以释放，如果装填的疑胶色谱柱中出现气泡，气泡会搅乱洗脱次序，降低分离效果。