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    【题目】我国科学家研制成功具有自主知识产权的融合Bt杀虫基因，并将其导入棉花，创造出Bt转基因抗虫棉。请回答该技术中的有关问题：

    (l)基因工程是在____水平上进行设计和施工的，常用的DNA连接酶有____。

    (2)PCR技术扩增目的基因的前提是____，以便根据这一序列合成引物。PCR中需要的特殊酶为____。

    (3)Bt毒蛋白基因必须插入棉花细胞的____，检测Bt毒蛋白基因是否导入棉花细胞的方法是________。

    (4)要检测抗虫棉是否成功，除了进行分子检测外，还需进行____水平的鉴定，如做____实验。

    【答案】分子 E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 Taq酶（热稳定DNA聚合酶） 染色体的DNA上 DNA分子杂交 个体 抗虫接种

    【解析】

    基因工程操作的工具是限制性核酸内切酶、DNA连接酶和运载体；基因工程操作的步骤为提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达。目的基因的检测有多种手段，如①DNA分子杂交技术；②分子杂交技术；③抗原-抗体杂交技术。

    （1）基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，故基因工程是在分子水平上进行的，常用的DNA连接酶有从大肠杆菌分离出来的E．coliDNA连接酶和从T4噬菌体中分离出来的T4DNA连接酶。

    （2）在PCR技术中扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。PCR中需使用的特殊酶是热稳定的DNA聚合酶（或Taq酶）。

    （3）Bt毒蛋白基因必须插入棉花细胞的染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。检测Bt毒蛋白基因是否导入棉花细胞的方法是DNA分子杂交的方法。

    （4）要检测抗虫棉是否成功，除了进行分子检测外，还需进行个体水平的鉴定，在个体水平上检测Bt基因在受体植株内是否成功表达，可采用的方法是抗虫接种实验。

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    A. 若这两对基因在一对同源染色体上，则有一对同源染色体出现2个黄色、2个绿色荧光点

    B. 若这两对基因在一对同源染色体上，则有一对同源染色体出现4个黄色、4个绿色荧光点

    C. 若这两对基因在2对同源染色体上，则有一对同源染色体出现2个黄色、2个绿色荧光点

    D. 若这两对基因在2对同源染色体上，则有一对同源染色体出现4个黄色、4个绿色荧光点

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    分 组

    步 骤

    红粒管

    白粒管

    对照管

    ①

    加样

    0.5mL提取液

    0.5mL提取液

    C

    ②

    加缓冲液（mL）

    1

    1

    1

    ③

    加淀粉溶液（mL）

    1

    1

    1

    ④

    37°C 保温适当时间，终止酶促反应，冷却至常温，加适量碘液显色

    显色结果

    +++

    +

    +++++

    注：“+”数目越多表示蓝色越深

    步骤①中加入C是_____________________，步骤②中加缓冲液的目的是_______________________。显色结果表明：淀粉酶活性较低的品种是_____________；据此推测：淀粉酶活性越低，穗发芽率越________。若步骤③中的淀粉溶液浓度适当减小，为保持显色结果不变，则保温时间应_________。

    （2）小麦淀粉酶包括：α-淀粉酶和β-淀粉酶，为进一步探究其活性在穗发芽率差异中的作用，设计了如下方案：

    I.红粒管、白粒管各加入相应提取液0.5mL，使α-淀粉酶失活；

    II.红粒管、白粒管各加入相应提取液0.5mL ，X处理。

    如上法实验操作并显色测定

    X处理的作用是使________________________。若I中两管显色结果无明显差异，且II中的显色结果为红粒管颜色___________ 白粒管（填“深于”或“浅于”），则表明α-淀粉酶活性是引起这两种小麦穗发芽率差异的主要原因。

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    A. 红 ：黄 ：白=12 ：3：1 B. 紫 ：红 ：黄 ：白=9 ：3 ：3 ：1

    C. 紫 ：红 ：白=9 ：3 ：4 D. 紫 ：黄 ：白=9 ：6 ：1

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    D. 肌糖原和肌动蛋白的合成都需要以RNA为模板

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