Question

4．绿色荧光蛋白基因（GFP）表达的产物能在特殊的条件下发出绿色荧光，在基因工程中可起到标记基因的作用，请回答：
（1）欲通过基因工程将大豆与赖氨酸含量较高有关的基因（记做H）导入玉米的体细胞中，并用GFP做标记基因培育赖氨酸含量较高的玉米时，可将绿色荧光蛋白基因与H基因连接到一起再和其它组分一起构建基因表达载体，然后导入玉米的体细胞，常用的导入方法是农杆菌转化法．
（2）科学家设想将（GFP）与控制某特异性抗体合成的基因一起导入能无限增殖的癌细胞中，通过培养这些细胞可从细胞产物中获得特异性抗体，在此过程中要对细胞培养液中的物质进行专一抗体检测，才能最后确定哪些细胞能产生所需抗体；但在实际生产中往往还需要进行最终个体生物学水平的鉴定，即从培养液中提取产物，看是否含有特异性抗体，能最后确定基因工程是否成功．
（3）如欲获得心脏细胞能发出绿色荧光的猪，应设法将绿色荧光蛋白基因导入猪的受精卵细胞中，常用的方法是显微注射法；然后通过细胞培养、胚胎移植等技术可获得转基因猪，为使GFP只在猪的心脏细胞中表达，应将GFP接到心脏细胞蛋白基因的启动子后面．
（4）获得转基因克隆猪时，需利用技术除（3）所述外还应有核移植技术，此过程需要准备的受体细胞是处于减数第二次分裂中期时期的次级卵母细胞．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）欲通过基因工程将大豆与赖氨酸含量较高有关的基因（记做H）导入玉米的体细胞中，并用GFP做标记基因培育赖氨酸含量较高的玉米时，可将绿色荧光蛋白基因与目的基因（H基因）连接到一起再和其它组分一起构建基因表达载体，然后导入玉米的体细胞；将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法．
（2）控制某特异性抗体合成的基因的表达产物是特异性抗体；在实际生产中往往还需要进行最终个体生物学水平的鉴定，即从培养液中提取产物，看是否含有特异性抗体，能最后确定基因工程是否成功．
（3）如欲获得心脏细胞能发出绿色荧光的猪，应设法将绿色荧光蛋白基因导入猪的受精卵细胞中，常用显微注射法；然后通过细胞培养、胚胎移植等技术可获得转基因猪，为使GFP只在猪的心脏细胞中表达，应将GFP接到心脏细胞蛋白基因的启动子后面．
（4）克隆动物还需要采用核移植技术，此过程需要准备的受体细胞是处于减数第二次分裂中期的次级卵母细胞．
故答案为：
（1）H基因    基因表达载体     农杆菌转化法
（2）特异性抗体    从培养液中提取产物，看是否含有特异性抗体
（3）受精卵     显微注射法    动物细胞培养、胚胎移植等     启动子
（4）核移植技术     减数第二次分裂中期

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．