Question

13．高等植物苦荞含有黄酮类化合物，有降血糖、降血脂作用．查尔酮合成酶（CHS）是黄酮类化合物合成的关键酶．如图是将CHS基因导入苦荞，培育高产黄酮类化合物苦荞的过程．请回答：

（1）EcoRⅠ的识别序列和切割位点是-G^↓AATTC-，CHS基因没有EcoRⅠ的识别序列，与质粒连接之前需在两侧连接相应的末端，该末端序列为-TTAA，连接时需要用DNA连接酶酶．
（2）将重组质粒导入苦荞体细胞采用最多的方法是农杆菌转化法．
（3）②是脱分化过程．苦荞体细胞能培养成完整植株的根本原因是苦荞体细胞中含有发育成完整个体所需的全部基因（全部遗传信息）．
（4）判断转基因苦荞培育是否成功，可比较转基因苦荞与普通苦荞的黄酮类化合物含量，也可测定细胞中CHS的含量．
（5）科研人员在培养基中加入6-BA（细胞分裂素类）和2，4-D，灭菌后分别接种苦荞叶片细胞，在适宜条件下培养一段时间后，统计愈伤组织的诱导率，实验结果如表：

该实验的目的是探究不同浓度6-BA和2，4-D对诱导愈伤组织的影响，诱导的最佳组合是0.1mg•L^-16-BA和4mg•L^-12，4-D．

Answer 1

分析 基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定．其中构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，需要限制酶和DNA连接酶．
植物组织培养技术包括脱分化和再分化两个重要过程，而决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要．

解答 解：（1）EcoRⅠ的识别序列和切割位点是-G^↓AATTC-，CHS基因没有EcoRⅠ的识别序列，与质粒连接之前需在两侧连接相应的末端，据图示可知，该黏性末端序列为-TTAA，连接时需要用DNA连接酶酶．
（2）将重组质粒导入苦荞体细胞采用最多的方法是农杆菌转化法．
（3）过程②、③分别是脱分化和再分化．苦荞体细胞能培养成植株的根本原因是植物细胞的全能性即细胞中含有发育成完整个体所必需的全部基因．
（4）判断转基因苦荞培育是否成功，可比较转基因苦荞与普通苦荞的黄酮类化合物含量，也可测定细胞中CHS含量．
（5）根据题意和图表分析可知：该实验的目的是探究不同浓度6-BA和2，4-D对诱导愈伤组织的影响，自变量是6-BA和2，4-D的浓度，因变量是诱导率，诱导的最佳组合是0.1mg•L ^-16-BA和4mg•L^-12，4-D．
故答案为：
（1）-TTAA        DNA连接酶
（2）农杆菌转化法
（3）脱分化       苦荞体细胞中含有发育成完整个体所需的全部基因（全部遗传信息）
（4）黄酮类化合物
（5）探究不同浓度6-BA和2，4-D对诱导愈伤组织的影响   0.1mg•L ^-16-BA和4mg•L^-12，4-D

点评 本题综合考查基因工程和植物细胞工程的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络的能力．