Question

【题目】肝和脾是机体重要的代谢和免疫器官。为探讨人类衰老进程中细胞中DNA含量变化规律，并为今后衰老相关研究提供基础实验数据，科研人员将组织库中老年尸检者的正常肝脾组织按年龄分为老年组(65~79岁)、高龄组(80~89岁)及长寿组(≥90岁)，测定其肝、脾基因组DNA的含量和纯度。实验主要操作步骤和实验结果如下：

①称取80℃冰箱中保存的肝、脾组织各100mg，分别放入1.5mL离心管中，同时加入样品裂解液，并用微量电动匀浆器充分匀浆。

②加入蛋白酶，56℃消化48h，90℃水浴保温1h。

③加入a酶和缓冲液，37℃水浴锅中保温Ih，以去除样品中的RNA。

④加氯仿一异戊醇，离心取b；加等体积冷酒精，离心取c。

⑤缓冲液溶解DNA，检测DNA的含量和纯度。

实验结果：

注：①表中OD260反映溶液中核酸的浓度，OD280反映溶液中蛋白质或氨基酸的浓度。理论上，纯DNA溶液的OD260/OD280为1.8，若比值大于1.8表示存在RNA残留，若小于1.8表示存在蛋白质污染。②氯仿一异戊醇密度大于水，能使蛋白质变性而抽提，与水和DNA均不相互溶。请回答下列问题：

(1)补全实验步骤：a___________，b___________，c___________。

(2)步骤①中加入“样品裂解液”作用是___________。步骤②将粗提液在90℃水浴保温Ih的目的是___________。

(3)由实验结果可知：与肝组织相比，从脾组织中提取的DNA中含有的杂质主要是___________。试简述如何改进操作___________。

(4)下列关于实验结果分析，错误的一项是___________。

a.比较老年组和高龄组DNA含量，说明DNA含量减少可能是衰老的分子基础

b.不同年龄的老年人肝组织DNA提取量较脾组织少，可能与肝组织细胞自溶较快有关

c.长寿组老年人在延长了寿命的同时，可能保持了DNA的修复能力，减少了DNA的损伤

d.与脾组织相比，肝组织含有的具有增殖能力的细胞比例较大

Answer 1

【答案】RNA 上清液 沉淀物 瓦解组织细胞膜 使部分蛋白质变性 RNA 增加步骤③中RNA酶的量（延长保温时间） d

【解析】

本题为根据年龄不同，分别测定老年组、高龄组和长寿组的尸检其肝、脾基因组DNA的含量和纯度，由实验结果的表格可知：高龄组的肝、脾基因组DNA的含量显著降低，且肝组织中OD260/OD280小于1.8，脾组织中OD260/OD280三组数值都大于1.8，三组之间差别不明显。

（1）提取基因组DNA过程：①称取80℃冰箱中保存的肝、脾组织各100mg，分别放入1.5mL离心管中，同时加入样品裂解液，并用微量电动匀浆器充分匀浆。

②加入蛋白酶，56℃消化48h，90℃水浴保温1h。

③加入RNA酶和缓冲液，水解RNA，去除RNA杂质。

④加氯仿一异戊醇，氯仿-异戊醇不溶于水且密度均大于水，DNA不溶于氯仿-异戊醇，因此离心取上清液；加等体积冷酒精，DNA溶于酒精中，离心取沉淀物。

⑤缓冲液溶解DNA，检测DNA的含量和纯度。

（2）步骤①中加入“样品裂解液”作用是瓦解组织细胞膜。步骤②将粗提液在90℃水浴保温Ih的目的是使部分蛋白质变性。

（3）由实验结果可知：影响DNA纯度的物质主要有蛋白质、RNA、小分子物质，与肝组织相比，从脾组织中提取的DNA中含有的杂质主要是RNA。因为步骤③的作用是去除RNA，因此可以增加步骤③中RNA酶的量（或延长保温时间）改进。

（4） a.比较老年组和高龄组DNA含量，高龄组的肝、脾基因组DNA的含量显著降低，说明DNA含量减少可能是衰老的分子基础，正确；

b.不同年龄的老年人肝组织DNA提取量均小于脾组织，可能与肝组织细胞自溶较快有关，正确；

c.长寿组老年人的肝、脾基因组DNA的含量与老年组差别不大，可能是长寿组老年人在延长了寿命的同时，可能保持了DNA的修复能力，减少了DNA的损伤，正确；

d.无论哪个组，与脾组织相比，肝组织DNA的含量均较少，说明肝细胞中含有的具有增殖能力的细胞比例较小，错误。

故选d。