Question

8．某质粒上有Sal I、HindIII、BamH I 三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题．

（1）将抗盐基因导入烟草细胞内，使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状（变异性状）的来源属基因重组于．
（2）在构建重组质粒时，应选用SalI和HindIII两种酶对质粒和抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
（3）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤．为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，图表示运用影印培养法（使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入了农杆菌．

培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有氨苄青霉素、四环素（氨苄青霉素和四环素）．从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是4和6菌落中的细菌．为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的抗盐基因作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌烟草植株方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性．
（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，愈伤组织经细胞增殖和分化进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素．

Answer 1

分析 分析图1：图示为转基因抗盐烟草的培育过程，首先构建基因表达载体；其次采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞（烟草细胞）；再采用植物组织培养技术将含有目的基因的烟草细胞培养成转基因抗盐烟草．
分析图2：图2是筛选含有重组质粒的农杆菌的过程，培养基A和B中应该分别加入氨苄青霉素、四环素．

解答 解：（1）基因工程的原理是基因重组．
（2）质粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三种限制酶切割位点，其中BamHI的切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因；若只用SalI一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalI和HindIII两种限制酶对质粒和抗盐基因进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
（3）用SalI和HindIII两种限制酶对质粒进行切割时，会破会四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的农杆菌能在含有氨苄青霉素的培养基上能生存，但不能在含有四环素培养基上生存，所以培养基A和培养基B分别还含有氨苄青霉素、四环素，含目的基因的是4和6菌落中的细菌．探针是指用放射性同位素标记的目的基因（抗盐基因）．除了从分子水平上进行检测，还可以从个体水平上进行鉴定，即用一定浓度的盐水浇灌烟草植株来鉴定烟草的耐盐性．
（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，愈伤组织经细胞增殖和分化进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素．
故答案为：
（1）基因重组
（2）Sal I Hind III 质粒抗盐基因的DNA
（3）氨苄青霉素   四环素（氨苄青霉素和四环素） 4 和6 抗盐基因   一定浓度的盐水浇灌烟草植株（将烟草植株移栽到盐碱地中）
（4）植物组织培养    细胞增殖和分化    植物激素（生长素和细胞分裂素）

点评 本题结合转基因抗盐烟草的培育过程图，考查基因工程、植物组织培养等知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，能根据图中限制酶的位置及题干要求选择正确的限制酶；能根据题中信息判断培养基中抗生素的名称；识记植物组织培养过程及条件．