Question

5．下面是探究如何从土壤中分离出自生固氮菌与计数的实验，完成下列问题：实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多．将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养．在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖．用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离．材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛有9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有90mL无菌水的锥形瓶、恒温箱．
（1）方法步骤：
①倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在酒精灯火焰旁操作．
②制备土壤稀释液：取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．用无菌吸管吸取上清液1mL，转至盛有9mL的无菌水的试管中，依次稀释到10⁷稀释度．
③涂布：按照由107～103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布3　个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个．
④培养：放入恒温箱内，在28℃～30℃下培养3d～4d．
⑤细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数．如果测定的平均值为50，则每克样品中的菌株数是5×10⁷．（稀释度是10⁵）
（2）预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数多于　（选填“多于”或“少于”）无氮培养基上的数目．原因是无氮培养基上只有自生固氮菌能生长繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上大多数菌类都能生长．
（3）制备牛肉膏蛋白胨培养基的操作过程是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．

Answer 1

分析 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：
（1）计算：依据是培养基配方的比例．
（2）称量：牛肉膏比较黏稠，可同称量纸一块称取．牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖．
（3）溶化：牛肉膏和称量纸+水加热取出称量纸→加蛋白胨和氯化钠→加琼脂（注意：要不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）→补加蒸馏水至100mL．
（4）调pH；
（5）灭菌：培养基采用高压蒸汽灭菌，培养皿采用干热灭菌．
（6）倒平板．
3、为避免实验误差，保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值．

解答 解：（1）①在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌污染．
③为了避免实验误差，保证结果准确，一般设置3～5个平板，空白对照组需要牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个．
⑤选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值．如果测定的平均值为50，则每克样品中的菌落数为（50÷0.1）×10⁵=5×10⁷．
（2）肉膏蛋白胨培养基作为对照，以消除无关变量对实验结果的影响，该培养基适合其他细菌生存，所以，它比无氮培养基上的菌落数目多．
（3）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．
故答案为：
（1）酒精灯火焰    3   1   30～300   5×10⁷
（2）多于    无氮培养基上只有自生固氮菌能生长繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上大多数菌类都能生长
（3）计算、称量、溶化、灭菌、倒平板

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记制备培养基的一般步骤，掌握微生物计数常用的方法，能结合所学的知识准确答题．