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    回答下列关于基因工程的问题下图1是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图2、图3中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

    (1)若对图2中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性如何变化，为什么？_____________。
    (2)图中将人乳铁蛋白基因插入质粒，可以只用EcoRⅠ同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，也可以使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，后一个方法的优点在于可以防止__________。
    (3)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入__________酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_____________。
    (4)图1过程①可采用的操作方法是____________，过程②可采用的生物技术是_____________。过程③可采用的生物技术是________________。
    (5)分别从分子水平简述雌性转基因牛分泌人乳铁蛋白的过程是___________________。
    (1)SmaⅠ识别的DNA序列只有G和C，而G和C之间可以形成三个氢键，A和T之间可以形成二个氢键，所以SmaⅠ酶切位点越多，热稳定性就越高
    (2)只使用EcoRⅠ，则质粒和目的基因两端的粘性末端相同，用连接酶连接时，会产生质粒和目的基因自身连接物，而利用BamHⅠ和HindⅢ剪切时，质粒和目的基因两端的粘性末端不同，用DNA连接酶连接时，不会产生自身连接产物。
    (3)DNA连接酶        筛选
    (4)显微注射       细胞培养        胚胎移植技术
    (5)DNA转录成mRNA，mRNA翻译成蛋白质
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    科目：高中生物 来源： 题型：

    回答下列关于基因工程的问题

    下图1是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图2、图3中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

    （1）若对图2中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性如何变化，为什么？                                                                     

    （2）图中将人乳铁蛋白基因插入质粒，可以只用EcoR I同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，也可以使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，后一个方法的优点在于可以防止                                        。

    （3）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入        酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了          。

    （4）图1过程①可采用的操作方法是             ，过程②可采用的生物技术是      。过程③可采用的生物技术是                 。

    （5）分别从分子水平简述雌性转基因牛分泌人乳铁蛋白的过程是_______________。

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    科目：高中生物 来源： 题型：阅读理解

    回答下列关于基因工程的问题：

    如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达，根据图示所给信息回答下列问题：

    (1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒时，用同一种限制性内切酶分别切割目的基因和质粒，露出相同的黏性末端，将切下的目的基因片段插入质粒的切口处再加入适量的             ，使质粒与目的基因结合成重组质粒。

    (2)目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒；有的导入的是普通质粒A；只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：

    将得到的细菌涂抹在一个含有                的培养基上，能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的，反之则没有。此过程中体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件                      ；                                            。

    (3)若进一步鉴定证明细菌中导入的是普通质粒A还是重组质粒，将得到的细菌涂抹在一个含有

                    的培养基上培养，若细菌                ，则导入的是普通质粒。如果利用DNA分子杂交原理来证明此过程，应该用                                    作为探针。

    （4）使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴                        的途径。

    (5) 目的基因表达成功后，“工程菌”明显不同于细菌D。从变异的来源看，此变异属于         

           。导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么?                    。

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    科目：高中生物 来源：河北省衡水中学2009—2010学年度第二学期期中考试高二生物试卷 题型：综合题

    回答下列关于基因工程的问题：
    如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达，根据图示所给信息回答下列问题：

    (1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒时，用同一种限制性内切酶分别切割目的基因和质粒，露出相同的黏性末端，将切下的目的基因片段插入质粒的切口处再加入适量的            ，使质粒与目的基因结合成重组质粒。
    (2)目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒；有的导入的是普通质粒A；只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：
    将得到的细菌涂抹在一个含有               的培养基上，能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的，反之则没有。此过程中体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件                     ；                                           。
    (3)若进一步鉴定证明细菌中导入的是普通质粒A还是重组质粒，将得到的细菌涂抹在一个含有
                   的培养基上培养，若细菌               ，则导入的是普通质粒。如果利用DNA分子杂交原理来证明此过程，应该用                                   作为探针。
    （4）使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴                       的途径。
    (5)目的基因表达成功后，“工程菌”明显不同于细菌D。从变异的来源看，此变异属于         
          。导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么?                   。

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    科目：高中生物 来源：2012-2013学年江苏省高三最后一次模拟考试生物试卷 题型：综合题

    回答下列关于基因工程的问题。

    草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内， 从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

    下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：

    （1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。

    （2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 ___________。

    （3）假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图1所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图1和2所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。

    （4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图2所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）

    （5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因_____________。

    下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）

    （6）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。

    （7）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和       kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）

     

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    科目：高中生物 来源：河北省2009—2010学年度第二学期期中考试高二生物试卷 题型：综合题

    回答下列关于基因工程的问题：

    如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达，根据图示所给信息回答下列问题：

    (1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒时，用同一种限制性内切酶分别切割目的基因和质粒，露出相同的黏性末端，将切下的目的基因片段插入质粒的切口处再加入适量的             ，使质粒与目的基因结合成重组质粒。

    (2)目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒；有的导入的是普通质粒A；只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：

    将得到的细菌涂抹在一个含有                的培养基上，能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的，反之则没有。此过程中体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件                      ；                                            。

    (3)若进一步鉴定证明细菌中导入的是普通质粒A还是重组质粒，将得到的细菌涂抹在一个含有

                    的培养基上培养，若细菌                ，则导入的是普通质粒。如果利用DNA分子杂交原理来证明此过程，应该用                                    作为探针。

    （4）使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴                        的途径。

    (5) 目的基因表达成功后，“工程菌”明显不同于细菌D。从变异的来源看，此变异属于         

           。导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么?                    。

     

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