Question

【题目】重金属嗜好性细菌在饮用水微污染和应急突发事件中能够用于水污染控制处理。获得高纯度、安全、高嗜好重金属的细菌，需要进行系列获取样本及其相关培养的实验。实验室选用铅、汞作为重金属实验剂。

（1）为了较快取得高嗜好重金属的细菌样本，一般选择_______________的土壤浸出液。

要提纯理想的菌种样本，研究小组将实验分两步，第一步是培养与提纯高嗜好重金属的细菌；由于这种细菌是用于饮用水的抗重金属污染，因此，第二步必须进行抗生素敏感性检测。

完成下列有关“培养、获取高纯度、高嗜好重金属细菌”的实验设计思路：

Ⅰ配制培养基：

（2）分别配制含____________不同浓度系列的_______态培养基。

Ⅱ 灭菌：

（3）采用高温、高压灭菌。高温高压灭菌有利于杀死________________

Ⅲ制备培养平板（培养皿中的培养基）；

Ⅳ菌种分离与培养：

（4）接种：___________________________________________________________

然后在适宜的环境中培养。

V菌种选择：

（5）选取________________________菌种备用。

选取安全性菌种的实验，一般采取抗生素敏感性实验法：

（6）对抗生素敏感性越强的细菌安全性越高，其判断理由是_______________________。

（7）用添加抗生素来筛选对抗生素高敏感的细菌，会由于这些细菌死亡而无法得到，试验时为准确定位和获取对抗生素高敏感的细菌，必须配制__________________培养基，在实验操作上，可采取先___________________________，然后通过“印章”法来接种到添加抗生素的培养基中培养，以准确定位和获得理想的菌群。

Answer 1

【答案】受金属污染或重金属含量高 汞、铅 固 细菌与芽孢 高浓度重金属培养基中的大菌落 用接种针取一定量的菌样，采取分区划线法接种在培养基上 对抗生素敏感度越高，细菌越容易被抗生素灭活，有利于保护人体健康 不含抗生素的对照 在对照培养基中进行接种、培养

【解析】

实验中要注意无菌操作，避免杂菌的污染，应选用选择培养基分离得到。

1、实验室常用的灭菌方法：

①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；

②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；

③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min。

2、培养基配制时的注意事项：

①全程要求无菌操作，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效地避免操作者自身被微生物感染。

②培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板．可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板．操作时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基。

③平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，若将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

④在倒平板的过程中，不能将培养基溅到皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。

（1）为了得到重金属嗜好性细菌，一般选择受金属污染或重金属含量高的土壤浸出液。

（2）应选用选择培养基分离、提纯理想的菌种样本．需要分别配制含汞、铅不同浓度系列的固态培养基。

（3）在此实验中要注意无菌操作，避免杂菌的污染，采用高温、高压灭菌．高温高压灭菌有利于杀死细菌与芽孢。

（4）可采用平板划线法接种：用接种针取一定量的菌样，采取分区划线法接种在培养基上然后在适宜的环境中培养。

（5）选择培养基分离并选取高浓度重金属培养基中的大菌落菌种备用。

（6）由于对抗生素敏感度越高，细菌越容易被抗生素灭活，有利于保护人体健康，因此对抗生素敏感性越强的细菌安全性越高。

（7）用添加抗生素来筛选对抗生素高敏感的细菌，试验时为准确定位和获取对抗生素高敏感的细菌，需要配制不含抗生素的对照培养基，在实验操作上，可采取先在对照培养基中进行接种、培养，然后通过“印章”法来接种到添加抗生素的培养基中培养，以准确定位和获得理想的菌群。