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    17．融合PCR技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如图1所示．图2是中间载体1和中间载体2（利用融合PCR技术构建成）构建成叶绿体定点整合表达载体示意图（限制酶酶切位点标注于载体外侧），叶绿体定点整合表达载体通过与叶绿体基因的同源重组，将目的基因整合于叶绿体DNA上的特定位点上．请据图回答下列问题．

    （1）图1第一阶段中PCR至少进行2次循环，才能获得双链等长的DNA，第二阶段中引物2与引物3部分碱基的互补配对关系使得两DNA能成功“搭桥”连接起来．
    （2）若通过融合PCR技术将启动子、标记基因、目的基因、终止子拼接起来，需要设计8种引物，其中能够起着“搭桥”作用的引物有6种．
    （3）图2中需使用Spe I、Sal I（填限制酶）和DNA连接酶将两中间载体构建成定点整合表达载体，途中定点整合表达载体上未标出的结构是复制原点．
    （4）叶绿体定点整合表达载体中叶绿体同源重组基因1和叶绿体同源重组基因2（填基因）能使目的基因准确插入叶绿体DNA上的特定位点上．与利用农杆菌转化法相比，利用定点整合表达载体将目的基因导入叶绿体中的优点是能实现定点整合到叶绿体中，且不易随花粉扩散带来安全问题．

    分析 1、限制性核酸内切酶（限制酶）：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性．
    DNA连接酶：缝合磷酸二酯键．
    2、PCR技术扩增目的基因
    （1）原理：DNA双链复制
    （2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成．
    3、基因表达载体的构建目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用．组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．根据图2显示，中间载体1的启动子一端有SpeI的切割位点和在终止子一端有SalI切割位点．并且“启动子-目的基因-终止子”这一段是插入在中间载体2的SpeI、SalI切割位点之间，因此构建如图的定点整合表达载体需使用SpeI、SalI和DNA连接酶．

    解答 解：（1）根据图示和PCR扩增技术的特点，可以推导出图1第一阶段中PCR至少经过2次循环才可以得到双链等长的DNA，如图所示：

    再根据图1中第二阶段是AB基因融合后，进行PCR扩增时需要引物1和引物4，可推导出第二阶段中引物2与引物3部分碱基互不配对使得两DNA能成功“搭桥”连接起来．
    （2）若通过融合PCR技术将启动子、标记基因、目的基因、终止子拼接起来，启动子与标记基因连接需要2种引物部分碱基配对，同样标记基因和目的基因、目的基因、终止子连接也各需要2种引物，同时在搭建而成的长的DNA分子的两端各需要1种引物，所以最终需要设计1+2+2+2+1=8种引物，其中两端的2种引物不能起“搭桥'的作用，因此能够起着“搭桥”作用的引物有8-2=6种．
    （3）根据图2显示，中间载体1的启动子一端有SpeI的切割位点和在终止子一端有SalI切割位点．并且“启动子-目的基因-终止子”这一段是插入在中间载体2的SpeI、SalI切割位点之间，因此构建如图的定点整合表达载体需使用SpeI、SalI和DNA连接酶．基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子、标记基因和复制原点，途中定点整合表达载体上未标出的结构是复制原点．
    （4）叶绿体定点整合表达载体中叶绿体同源重组基因1和叶绿体同源重组基因2能使目的基因准确插入叶绿体DNA上的特定位点上．与利用农杆菌转化法相比，利用定点整合表达载体将目的基因导入叶绿体中的优点是能实现定点整合到叶绿体中，且不易随花粉扩散带来安全问题．
     故答案为：
    （1）2    互补配对
    （2）8    6
    （3）Spe I、Sal I       复制原点
    （4）叶绿体同源重组基因1和叶绿体同源重组基因2
    能实现定点整合到叶绿体中，且不易随花粉扩散带来安全问题

    点评 本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生分析题文提取信息的能力；能理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识和观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论．

    练习册系列答案
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    ①孟德尔提出杂合子测交后代性状分离比为 1：1 的假说，并通过实际种植来演绎

    ②赫尔希和蔡斯提出中心法则

    ③格里菲思利用肺炎双球菌研究遗传物质时，运用了放射性同位素示踪技术

    ④在探究遗传物质的实验中，艾弗里的细菌转化实验对 DNA 和蛋白质等大分子进行了分离

    ⑤沃森和克里克研究 DNA 分子结构时，运用了建构物理模型的方法

    A．两种 B．三种 C．四种 D．五种

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    年份198719881989199019911992
    出生率/%17.927.329.622.724.930.2
    存活数/只4454667896122
    A．1988年麋鹿种群的死亡率约为4.5%
    B．保护区进行麋鹿野生放归，有助于提高麋鹿的遗传多样性
    C．1987年到1992年麋鹿的性别比例保持相对稳定
    D．麋鹿引入保护区后，总群数量增加的原因是食物空间充足、气候适宜、天敌少

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    A．图示过程发生在细胞有丝分裂的间期
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    C．过程①②所需的模板相同但原料不同
    D．过程②③中碱基互补配对方式相同

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    12．下列关于果酒、果醋和腐乳制作的叙述，正确的是（　　）
    A．参与发酵的微生物都是异养的真核生物
    B．发酵全过程都需要防止杂菌污染，以免降低产品品质
    C．发酵过程都需在适宜温度下进行，腐乳制作温度最高
    D．产品中都需添香辛料和盐等佐料，以提高产品的口感

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    2．图Ⅰ是某组织局部结构模式图．图Ⅱ是人体甲状腺激素分泌的分级调节示意图，甲、乙、丙分别代表腺体名称，X、Y代表激素名称．下列叙述不正确的是（　　）
    A．图Ⅰ中，红细胞通过协助扩散吸收血糖进行无氧呼吸产生CO2
    B．某人长期营养不良，则会引起图Ⅰ中A液增多
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    科目：高中生物 来源：2015-2016贵州思南中学高二下学期第一次月考生物试卷（解析版） 题型：综合题

    尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答。

    KH2PO4

    Na2HPO4

    MgSO4·7H2O

    葡萄糖

    尿素

    琼脂

    1．4

    g

    2．1

    g

    0．2

    g

    10

    g

    1

    g

    15

    g

    将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。

    （1）按物理性质分，此培养基属于______ 。

    （2）培养基中加入尿素的目的是， 这种培养基属于 培养基。

    （3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的 和 ，实验需要振荡原因是 。

    （4）图中将细菌转到固体培养基上时，可采用____________接种，获得单菌落后继续筛选。

    （5）在实验中，下列材料或用具需要灭菌的是 ，需要消毒的是 。（填序号）

    ①培养细菌用的培养基与培养皿

    ②玻棒、试管、锥形瓶和吸管

    ③实验操作者的双手

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    某同学在①、②、③三种条件下培养大肠杆菌，这三种条件是：

    ①以葡萄糖为碳源的培养基，不断补充培养基，及时去除代谢产物；

    ②以葡萄糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物；

    ③以葡萄糖和乳糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物；

    根据培养结果绘制的一段时间内菌体数的对数随时间变化的趋势图如下：

    假设三种培养基中初始总糖量相等，则①、②、③三种条件依次对应的趋势图是（ ）

    A甲、乙、丙 B．乙、丙、甲

    C．丙、甲、乙 D．丙、乙、甲

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    Ⅰ．图中甲、乙分别是两类高等生物细胞的亚显微结构模式图，请据图回答：

    （1）在甲、乙两细胞中都存在，且含有核酸的细胞器有________（填编号）。

    （2）甲图中具有双层膜结构的细胞器有_______（填编号）；乙图中能够产生ATP的场所是______（填编号）。

    （3）若乙细胞为消化腺细胞，将3H标记的亮氨酸注入该细胞，在该细胞的结构中3H出现的先后顺序依次是___________（用箭头和编号表示）。

    （4）如果用某种药物处理乙细胞，发现其对Ca2＋的吸收速率大大降低，而对其他物质的吸收速率没有影响，说明这种药物的作用是_______________。

    Ⅱ．下图为某细胞的部分结构及蛋白质转运示意图,请回答下列问题。

    （1）内质网上合成的蛋白质不能穿过 进入细胞核,表明这种转运具有 性。

    （2）细胞膜选择透过性的分子基础是 具有疏水性和 具有专一性。

    （3）若该细胞是高等植物的叶肉细胞,则图示未绘制的细胞器有 。

    （4）若该细胞为小鼠骨髓造血干细胞,则图中细胞处于细胞周期的 ,此时在光学显微镜下观察明显可见细胞核中有 存在。

    （5）研究表明硒对线粒体膜有稳定作用,可以推测人体缺硒时下列细胞中最易受损的是 （填序号）。

    ①脂肪细胞 ②淋巴细胞 ③心肌细胞 ④口腔上皮细胞

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