Question

GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：

（1）完成图中A过程必需的工具是 ；该基因治疗的受体细胞为 。

（2）基因工程最核心的步骤是 。

（3）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图中的 限制酶进行酶切。

（4）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如下图表示四种质粒,其中,箭头所指部位为酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示GDNF基因运载体的是 。

（5）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，正确的是_______。

A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列

B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同

C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解

D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的

（6）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为 个，反向连接的重组载体产生片段有 （多选）。

①100bp ②200bp ③600bp ④700bp ⑤6000bp ⑥6500bp

Answer 1