下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。下列说法正确的是 （ ）
A．一个图1所示的质粒子分子经Sma I切割前后，分别含有1、2个游离的磷酸基团
B．若对图中质粒进行改造，插入的Sma I酶切位点越多，质粒的热稳定性越低
C．与只使用EcoRI 相比较，使用BamHI 和HindIII两种限制酶同时处理质粒，外源DNA的优点在于可以防止质粒和含目的基因的DNA自身环化
D．为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在只含蔗糖的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
C
【解析】质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团。从图1可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团。由题目可知，SmaⅠ识别的DNA序列只有G和C，而G和C之间可以形成三个氢键，A和T之间可以形成二个氢键，所以SmaⅠ酶切位点越多，热稳定性就越高，质粒抗生素抗性基因为标记基因，由图2可知，标记基因和外源DNA目的基因中均含有SmaⅠ酶切位点，都可以被SmaⅠ破坏，故不能使用该酶剪切含有目的基因的DNA， 只使用EcoR I，则质粒和目的基因两端的粘性末端相同，用连接酶连接时，会产生质粒和目的基因自身连接物，而利用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ剪切时，质粒和目的基因两端的粘性末端不同，用DNA连接酶连接时，不会产生自身连接产物。质粒和目的基因连接后获得重组质粒，该过程需要连接酶作用，故混合后加入DNA连接酶。质粒上的抗性基因为标记基因，用于鉴别和筛选含有重组质粒的受体细胞。将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体后，含有重组质粒的个体才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作为唯一碳源的培养基进行培养受体细胞，含有重组质粒的细胞才能存活，不含有重组质粒的因不能获得碳源而死亡，从而达到筛选目的。所以C选项正确。
科目：高中生物 来源：2011届上海市奉贤区高三上学期调研测试生命科学试卷 题型：综合题
分析有关基因工程的资料，回答问题。（8分）
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
58、一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割后，含有 个游离的磷酸基团。
59、用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是
。
60、为了获取重组质粒，应将 与 混合，并加入 酶。
61、重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。
62、若外源DNA中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则其连续复制4次，至少需要提供胸腺嘧啶 个。
63、利用转基因牛、羊乳汁提取药物工艺简单，甚至可能直接饮用治病。如果将药物蛋白基因移到动物如牛、羊的膀胱上皮细胞中，利用转基因牛羊尿液生产提取药物比乳汁提取药物的更大优越性在于 。
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科目：高中生物 来源：2011届江西省安福中学高三年级入学考试生物试卷 题型：综合题
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，
图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有 个游离的磷酸基因。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是
。
（4）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BmaHⅠ和Hi
nd Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 
。
（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。
（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。
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科目：高中生物 来源：2013-2014学年湖南益阳箴言中学高三第二次模拟考试生物卷（解析版） 题型：综合题
回答基因工程中的有关问题：（15分）
Ⅰ．限制酶是基因工程中的重要工具酶，下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图甲、图乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
（1）一个图甲所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 个和_______ 个游离的磷酸基团？
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。
（3）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。
Ⅱ．原核生物（如大肠杆菌）是基因工程中较理想的受体细胞，它们具有一些其他生物没有的特点：①繁殖快②多为单细胞③______________等优点．大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用_________处理细胞，使之成为____________细胞，然后完成转化．
Ⅲ．植物基因工程中将目的基因导入受体细胞最常用的方法是__________,且一般将目的基因插入Ｔi质粒的____________中形成重组Ｔi质粒，这样可将目的基因整合到受体细胞的染色体上，科学家发现：这样得到的转基因植株，其目的基因的传递符合孟德尔遗传规律，则该转基因植株一般为___________子。若要避免基因污染，一般需将目的基因导入植物细胞的__________DNA中。
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科目：高中生物 来源：2014届广东省高二第二学期期末考试生物试卷（解析版） 题型：选择题
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，下图中箭头表示相关限制酶的酶切位
点，下列叙述不正确的是
A．图中质粒分子经SmaⅠ切割后含有4个游离的磷酸基团
B．若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越高
C．抗生素抗性基因的作用是为了鉴别和筛选含有目的基因的细胞
D．用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒和外源DNA比只用EcoRⅠ一种酶更好
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科目：高中生物 来源：2012-2013学年甘肃省高三11月月考生物试卷（解析版） 题型：综合题
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点。
下图是转基因抗病香蕉的培育过程，含目的基因的外源DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
(1) 用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaI酶切割，原因是__________________________________________。
(2) 构建含目的基因的重组质粒A时，选 用 BamhHI 和HindⅢ酶对_______和 _______进行切割，可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化。
(3) ①?⑤中存在碱基互补配对的是____________。
(4) 香蕉组织细胞具有__________，因此，可以利用组织培养技术将导入目的(抗病)基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中④、⑤依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的_________、____________。培养皿中的培养基除添加营养物质外，还需要添加_________和__________以诱导外植体完成④、⑤生理过程，培养成完整的植物体。在形成愈伤组织的过程中，细胞的新陈代谢类型是_____________。
(5) 如何检测图示过程最终是否取得成功？____________________________。
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