Question

科学家利用基因工程技术成功地将人的胰岛素基因导入大肠杆菌体内，生产出入的胰岛素。在该过程中用质粒作为运载体，已知质粒上含有抗氨苄青霉素（简称氨苄）和抗四环素的基因（位于不同区段），目的基因与质粒的结合位点刚好位于抗氨苄青霉素基因结构内，且受体大肠杆菌体内不含质粒，也不含质粒上的抗药基因。导入完成后，实际上在得到的大肠杆菌中，有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒，只有少数导入的是重组质粒。

 某科研机构想从培养基上筛选出含重组质粒的大肠杆菌（即“目的菌种”），他们设计了如下实验方案：

第一步：将得到的大肠杆菌接种在含         的培养基上，筛选出含有质粒的大肠杆菌。

第二步：为选出“目的菌种”，将第一步筛选出的大肠杆菌用“影印法”分离。

(1)采用涂布平板法，将第一步筛选的大肠杆菌以合适的稀释度涂布到含        质粒的大肠杆菌和含    质粒的大肠杆菌都能生长的培养基上，经培养后形成单菌落，如图B所示。

(2)通过一消毒的“印章”（如图A所示），将培养基上的菌落分别按原位印到下图所示的非选择培养基        和选择培养基         上（顺序不能颠倒，C培养基成分与B相同，D上含有氨苄青霉素）。

(3)培养后对照观察C、D培养基上的单菌落。

(4)在C培养基上挑取D培养基上         的位置上的单菌落，从而获得含重组质粒的大肠杆菌，即“目的菌种”。

(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，这样做的目的是                  。

Answer 1

四环素   (1)普通      重组      (2)C   D         (4)不长菌落        (5)防止污染环境

解析:

此题通过重组微生物考查微生物的筛选与应用，属于考纲综合运用层次。因为目的基因与质粒的结合位点刚好位于抗氨苄青霉素基因结构内，因此重组质粒只含有完整的抗四环素的基因，含有重组质粒的大肠杆菌可以在含四环素的培养基上生长。因为是在在C培养基上挑取D培养基上对应的位置上的单菌落，因此C培养基不含有氨苄青霉素，D培养基含有氨苄青霉素。含有重组质粒的大肠杆菌只能抗四环素，含有正常质粒的大肠杆菌还可以抗氨苄青霉素。实验过后的培养基上含有微生物，因此要进行灭菌处理之后才可以倒掉，复制污染环境。