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    绿色荧光蛋白(GFP)是由GFP基因表达的一种能在紫外线照射下发出绿色荧光的蛋白质，它首先在水母中发现。如图为培育绿色荧光蛋白转基因猪的流程图，此猪的获得，运用了哪些技术

    ①转基因技术②核移植技术③早期胚胎培养技术④胚胎移植技术等⑤显微注射技术⑥胚胎分割技术

    A．①②③④⑥   B．①②④⑤⑥   C．①②③④⑤   D．①②③④⑤⑥

    【答案】C

    【解析】本题考查胚胎培养的相关技术。此项研究，应用了多项技术，分别是转基因技术、核移植技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术等；如果受体细胞是动物细胞，表达载体的导入一般用显微注射法。

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    下村修1962年在普林斯顿大学做研究的时候从一种水母身上分离出绿色荧光蛋白(GFP)。当时知道在蓝光或紫外光的激发下，它会发出绿色荧光。科学家1992年克隆出了GFP基因，随后马丁·沙尔菲成功地让GFP基因在大肠杆菌和线虫中表达。之后，会发光的鼠、猪、猫、兔、蝌蚪、鱼等也相继问世。如图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，有关转基因绿色荧光鼠的说法不正确的是(　　)

    A．与体内DNA复制相比，PCR技术复制GFP基因也需加入解旋酶和DNA聚合酶

    B．过程①构建的基因表达载体的组成必须含有启动子、终止子、复制原点、GFP基因和标记基因

    C．过程④选择代孕母鼠的条件是有健康的体质和正常繁殖能力的个体

    D．如果将外源基因导入小鼠受精卵，则外源基因可能随机插入到小鼠受精卵DNA中，这种受精卵有的可发育成转基因小鼠，有的却死亡

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    科目：高中生物 来源：2010年广东省汕头市金山中学高二下学期期中试题生物卷 题型：综合题

    2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

    （1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。若限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是一G↓GATCC一，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC一。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
    ①请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。
    ②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来? ＿＿＿＿＿。理由是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
    （2）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能,且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以运用作为基因表达载体上的＿＿＿＿＿＿。
    （3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。然后还要通过＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上。
    （4）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通过显微操作将其细胞核去除。
    （5）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿等物质。
    （6）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程属于＿＿＿＿＿＿生殖。目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：＿＿＿＿＿＿(用数字表示)。
    ①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
    ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计
    ③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
    ④表达出蓝色荧光蛋白

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    科目：高中生物 来源：2013届黑龙江省高二下学期期末考试生物试卷（解析版） 题型：综合题

    美籍华裔科学家钱永键和日本海洋生生学家下村修等人因在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面的突出贡献，获得了2008年诺贝尔化学奖。下图是我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

    (1)图中通过①、②过程形成重组质粒，需要用同一种限制酶切割目的基因和质粒。限制酶的特点是                                                。

    (2)③过程将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是                   。

    (3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是                            。

    (4)以上培育过程中应用到的生物技术主要有         、         、         等。(写三项即可)

    (5)④过程形成重组细胞时应用      期的卵母细胞，去掉其细胞核的原因是                   。

     

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    科目：高中生物 来源：2011-2012学年浙江省高三上学期期中考试生物试卷 题型：综合题

    (6分)2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白(GFP)会发出绿色荧光，可借助荧光跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：

    请根据上述材料回答下列问题：

     (1)在某种生物中检测不到绿色荧光，将水母绿色荧光蛋白基因转入该生物体内后，结果可以检测到绿色荧光。由此可知（   ）

     A．该生物的基因型是杂合的         

    B．该生物与水母有很近的亲缘关系

      C．绿色荧光蛋白基因在该生物体内得到了表达

      D．改变绿色荧光蛋白基因的1个核苷酸对，就不能检测到绿色荧光

     (2) 在培育绿色荧光小鼠的过程中，基因表达载体的构建是核心。完整的基因表达载体至少包括目的基因、________、终止子和启动子等部分。

     (3) 上图操作流程中用到的工具酶有________。

    (4) 为迅速增加绿色荧光小鼠的数量，可采用胚胎工程技术有超数排卵受精，                、              。

     

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    科目：高中生物 来源：2013届广东省梅州市高二第二学期3月月考生物试卷 题型：综合题

    美籍华人钱永健和日本下村修、美国沙尔菲因等在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。GFP会发出绿色荧光，该蛋白质在生物工程中有着广阔的应用前景。请据图回答：

    (1)过程①中获取绿色荧光蛋白基因的工具是____________，该基因在实验中是________基因。

    (2)过程②形成重组质粒用到的酶是_________________                          ______，

    过程③采用的方法是__________              ______。

    (3)在过程④进行转基因体细胞的筛选时，比较简易的方法是

    ________________________________________________________________       ________。

    (4)在过程⑥培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素以及____________等天然成分。

    (5)以上培育过程中，④和⑤应用到的生物技术名称分别是________________、_____      。

     

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