某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起。该同学设计了下面的实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。
（1）实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮的培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。
（2）材料用具：（略）
（3）主要步骤：
①制备两种培养基，一种是无氮培养基，另一种是含青霉素的培养基，将两种培养基分成两份，依次标上A、a和B、b。
②分别向A、B培养基中接种混合菌，适宜条件培养3～4天。
③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，适宜条件下培养3～4天。
（4）请回答：
①本实验中，根据上述原理配制的培养基属于____________________培养基，在配制时除营养要协调外还应注意_________________________________________________________
___________________________________________________。
②圆褐固氮菌与酵母菌在结构上的主要差异是___________________________________
_________________________________________________________________________________________________________________________。
③青霉素抑制圆褐固氮菌的生长繁殖，其作用机理是破坏或抑制其细胞壁的形成。据此你推测青霉素不影响酵母菌与真菌生长繁殖的原因是____________________。
阳光课堂同步练习系列答案科目：高中生物 来源： 题型：
某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起，请你设计实验分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。?
（1）实验原理： 。?
（2）材料用具：配制培养基所需要的各种原料、无菌操作箱、接种环等。?
（3）简述主要步骤：?
①制备两种培养基，一种是 培养基；另一种是 培养基。分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用。?
②分别向A、B培养基中接种混合菌。?
③接种后，放在恒温箱中培养3~4 d。?
④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌，分别接种到a、b培养基中。?
⑤接种后，把a、b培养基再放入恒温箱中培养3~4 d。?
（4）实验结果：在a、b培养基上获得的分别是 、 。?
（5）回答问题：?
步骤④、⑤的目的是 。?
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科目：高中生物 来源：2011-2012学年安徽宿松复兴中学高二下学期第三次月考生物试卷（带解析） 题型：综合题
（10分）圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
①分别配置 的培养基和 的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
②分别向A、B培养基接种 ；
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
④从A、B培养基上生长的 中挑取生长良好的菌株，分别接种到 中；
⑤ 。
（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
| 反应条件 | ||
| | 温度 | 时间 |
| 变 性 | 95℃ | 30s |
| 复 性 | 55℃ | 30s |
| 延 伸 | 72℃ | 1min |
| 30个循环后 | 适宜 | 5-10min |
| 保 温 | 4℃ | 2h |
| PCR反应体系 | 50ul |
| 缓冲液 | 5ul |
| 脱氧核苷酸 | 1ul |
| 引物A | 0.5ul |
| 引物B | 0.5ul |
| DNA聚合酶 | 0.5U |
| 模板DNA | 1-2ul |
| 加去离子水补足至50 ul | |
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科目：高中生物 来源：2013-2014学年湖北孝感高三第二次统一考试生物试卷（解析版） 题型：综合题
某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌（可利用空气中Ｎ２合成含氮有机物）和酵母菌混合在一起，得到混合菌。请你完成得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的分离实验
步骤，并回答有关问题：
（１）主要步骤：
①制备两种培养基：一种是????????? 培养基，另一种是加????????? 的培养基。分别分成
两份，依次标上Ａ，Ａ′和Ｂ，Ｂ′，备用。
②分别向Ａ、Ｂ培养基中接种????????????? 。
③接种后，放在恒温箱中培养３～４天。
④分别从Ａ、Ｂ培养基生长良好的菌落中挑取菌种，按照Ａ→Ａ′，Ｂ→Ｂ′的方式进行接种。
⑤接种后，把Ａ′、Ｂ′培养基放入恒温箱中培养３～４天。
（２）回答问题：
在步骤①中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有：对培养基进行
；将???????????? 在酒精灯火焰上灭菌；接种过程在?????????????? 附近进行。
第④⑤两个步骤的目的是获得????????????????????????????????????????????????? 。
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科目：高中生物 来源：上海市2010届高三第二次联考生物试卷 题型：综合题
（9分）请回答下列有关微生物的问题。
（1）在微生物分离、鉴定实验中，通常在配置固体培养基时需在培养基中加入 ___（物质）。
（2）采用固体平板培养细菌时，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿 ____培养。
（3）下表为探究抗生素对微生物抑制作用的实验处理。先将大肠杆菌接种于培养基上，然后将培养皿置于37℃条件下培养2~3天，观察、测量并记录 _______________情况。如果实验所用抗生素的浓度关系为A< C < B，则编号1、2、3、4的抑菌效果从大到小依次为 __________________________________。
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编号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
||
|
|
圆纸片浸在 |
|||||
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浓度A抗生素 |
浓度B抗生素 |
浓度C抗生素 |
蒸馏水 |
|||
|
|
|
|
|
（4）现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序， 于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响结果如下表所示。
根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是 。
（5）某同学在做微生物实验时，不小心把自生固氮菌和酵母菌混在一起，请你帮助该同学完善实验步骤，将自生固氮菌和酵母菌分离开来：
①制备两种培养基，对两种培养基的处理方式分别是：一种是 ，另一种是 ，将两种培养基各自分成两份，依次标上A，a和B，b。
②分别向A、B培养基中接种 菌，适宜条件下培养3-4天。
③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a和b培养基中，适宜条件下培养3-4天。其目的是 。
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科目：高中生物 来源：2010-2011学年高考复习单元检测：选修一生物技术实践专题 题型：综合题
某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起，请你设计实验分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。
(1)实验原理：
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)材料用具：配制培养基所需要的各种原料、无菌操作箱、接种环等。
(3)简述主要步骤：
①制备两种培养基，一种是________培养基；另一种是________培养基。分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用。
②分别向A、B培养基中接种混合菌。
③接种后，放在恒温箱中培养3～4 d。
④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌，分别接种到a、b培养基中。
⑤接种后，把a、b培养基再放入恒温箱中培养3～4 d。
(4)实验结果：在a、b培养基上获得的分别是________、________。
(5)回答问题：
步骤④、⑤的目的是
________________________________________________________________________。
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