Question

【题目】某化工厂土壤中含有大量的某种有毒化合物，为了从土壤中筛选出能够将这种化合物分解的菌株，改良土壤，改变当地生态环境。科研人员进行如下实验：

实验原理：固体培养基中某有毒化合物在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如下图），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物分解的能力大小。

实验步骤：

步骤一取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀释液1mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h。

步骤二在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3~4d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良分解性能的菌株（如下表）。

菌株	透明圈直径（D）	菌落直径（d）
M一3一01I	18.8	12.3
B3一5一6	20.7	8.0
T1一4一01	9.1	6.5

请分析回答：

（1）根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是________________。

（2）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基B中，并在37°C、200r·min- 1摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量得到如图所示曲线。结果表明最优良的解磷菌株是_____________。

（3）若要对解磷菌计数需要进行纯化。在纯化菌种时接种了6个平板，每个平板均接种了0.lmL样品并培养。菌落数分别是210、230、470\190\29，则样品中菌种的数量为______个/mL。和直接用显微镜计数的结果对比__________（填写“偏大”或“偏小”），理由是_____________。

（4）对培养液进行灭菌时，高压灭菌锅的锅盖的排气管应放在灭菌桶___________（填写“内侧”或“外侧”）灭好菌后切断高压蒸汽灭菌锅热源，____________，打开放气阀放气，然后开启锅盖取出培养液。

Answer 1

【答案】B3一5一6 M一3一01 2100 偏小 当两个或多个细胞连在一起时，平板上看到的只是一个菌落，统计的是活菌数；显微镜直接计数往往是死菌活菌都计数 内侧 待压力表归零后

【解析】

根据题意和图表分析，固体培养基中某有毒化合物在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈，透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物分解的能力大小，即图中该比值越大，说明微生物分解的能力越大，表格中B3一5一6的该比值最大，说明B3一5一6的分解能力最强。

（1）根据以上分析已知，溶解磷能力最强的菌株是B3一5一6。

（2）根据实验曲线图，不难看出M-3-01实际溶解磷能力最强。

（3）微生物计数应该选择30-300 的菌落数，因此样品中菌种的数量=（210+230+190）÷3÷0.1=2100个。当两个或多个细胞连在一起时，平板上看到的只是一个菌落，统计的是活菌数；显微镜直接计数往往是死菌活菌都计数，所以计算出的值和直接用显微镜计数的结果对比偏小。

（4）对培养液进行灭菌时，高压灭菌锅的锅盖的排气管应放在灭菌桶内侧，灭好菌后切断高压蒸汽灭菌锅热源，待压力表归零后，打开放气阀放气，然后开启锅盖取出培养液。