Question

3．某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下．将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用．

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4•7H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4 g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？不能（填“能”或“不能”），原因是培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物（培养基含蛋白胨，蛋白胨中含有氮元素）．
（2）培养基用高压蒸汽灭菌方法灭菌，培养皿用干热灭菌方法灭菌，待培养基冷却到50℃（填“20”、“30”、“40”或“50”）左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基，以免造成污染．
（3）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用（稀释）涂布平板法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数目就能大约推测出样品中活菌数．
（4）培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染．对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生．
（5）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散．

Answer 1

分析 筛选纤维素分解菌需要以纤维素为唯一的碳源的选择培养基．分离纤维素分解菌计数时需要用稀释涂布平板法接种．

解答 解：（1）据表分析，表中的蛋白胨可以为微生物的生存提供氮源，所以不能分离尿素分解菌，筛选纤维素分解菌需要以纤维素为唯一的碳源的选择培养基．
（2）微生物培养中的培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌，玻璃器皿可以使用干热灭菌．倒平板时需要培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰旁进行，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基造成污染．
（3）固体培养基上的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，稀释涂布平板法适用于微生物的统计计数，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数目/平均菌落数能够推测样品中的活菌数．
（4）检测培养基是否被污染，需要将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生，如果有菌落数目被污染，否则没有被污染．
（5）为防止微生物污染环境和操作者，实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌后倒掉．
故答案为：
（1）不能　 培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物（培养基含蛋白胨，蛋白胨中含有氮元素）
（2）高压蒸汽灭菌  干热灭菌  50  酒精灯火焰  培养皿盖上的水珠落入培养基
（3）（稀释）涂布平板　 菌落数目
（4）将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
（5）灭菌

点评 本题主要考查尿素分解菌的筛选即培养，意在强化学生对选择培养基和无菌操作的理解运用．