Question

（12分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。下图一是转基因抗冻番茄培育过程的示意图，图二为质粒限制酶酶切图谱。鱼的抗冻蛋白基因不含图中限制酶识别序列，Ampr为抗氨苄青霉素基因，其中①—④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）获取鱼的抗冻蛋白基因途径主要有 。为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的 之后 。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的 过程。

（2）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。该酶的特点 。在此实例中，应该选用限制酶 切割。

（3）要利用培养基筛选出已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有 作为标记基因。

（4）研究人员通常采用 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用 技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

Answer 1

（1）从体细胞中分离和化学方法人工合成 启动子 脱分化、再分化

（2）识别特定的DNA序列并在特定位点切割 NdeⅠ、BamHⅠ

（3）抗氨苄青霉素基因(Ampr)

（4）农杆菌转化(或基因枪法等) 抗原-抗体

【解析】

试题分析：

（1）获取目的基因的主要途径有从体细胞中分离和化学方法人工合成；构建基因表达载体时，必须将目的基因插入启动子之后；分析题图可知，图中③为脱分化过程，形成愈伤组织，④为再分化过程，形成胚状体。

（2）限制酶的作用特点是能识别特定的DNA序列并在特定位点切割DNA分子；分析题图可知，启动子和终止子之间有三个限制酶位点：NdeⅠ、Xba I和BamHⅠ，其中质粒中Xba I的酶切位点有两个，会把终止子切掉，因此不能用Xba I进行切割，而NdeⅠ、BamHⅠ的位点都只有一个，因此最好用NdeⅠ、BamHⅠ两种限制酶进行切割，可以防止目的基因插入时出现反向连接。

（3）分析题图，图中Ampr为抗氨苄青霉素基因，为标记基因，可以用于目的基因的检测与鉴定。

（4）把目的基因导入植物细胞的方法最常用的是农杆菌转化法；检测目的基因是否翻译成蛋白质的方法是抗原-抗体杂交技术。

考点：本题考查基因工程的有关知识，意在考查考生识记能力、识图能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。