Question

15．严重复合型免疫缺陷症的基因治疗方法是：先从病人体内获得淋巴细胞进行体外培养，然后将腺苷酸脱氨酶基因利用逆转录病毒作为运载体转移到淋巴细胞，再筛选成功转移的细胞增殖培养，最后重新输入患者体内．回答下列问题：
（1）体外培养淋巴细胞，应保证处于无菌、无毒环境，在合成培养基中通常加入适量的血清（血浆）等天然成分，培养应在含5%CO₂的培养箱中进行，CO₂的作用是维持培养液的PH．
（2）该基因治疗过程是在逆转录病毒的逆（反）转录酶作用下，使RNA逆转录为DNA，与目的基因整合后插入到淋巴细胞基因组中．基因表达载体除含有目的基因外，还必须含有启动子、终止子等控制基因表达的信号序列．
（3）淋巴细胞主要在人体的骨髓（器官）中分化形成，并参与人体的特异性免疫．
（4）淋巴细胞的DNA上是否插入了目的基因，一般用放射性同位素（荧光）标记的腺苷酸脱氨酶基因作为探针，进行DNA分子杂交检测．

Answer 1

分析 1、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．
2、动物细胞培养的条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物．
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH．
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．
3、基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
4、基因探针--用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段．

解答 解：（1）体外培养淋巴细胞，应保证处于无菌、无毒的环境，在合成培养基中通常加入适量的血清、血浆等天然成分，培养应在含5%CO₂的培养箱中进行，CO₂的作用是维持培养液的PH．
（2）该基因治疗过程是在逆转录病毒的逆转录酶作用下，使RNA逆转录为DNA，与目的基因整合后插入到淋巴细胞基因组中．基因表达载体除含有目的基因外，还必须含有启动子、终止子等控制基因表达的信号序列．
（3）淋巴细胞主要在人体的骨髓中分化形成，并参与人体的特异性免疫．
（4）淋巴细胞的DNA上是否插入了目的基因，一般用放射性同位素（荧光）标记的腺苷酸脱氨酶基因作为探针，进行DNA分子杂交检测．
故答案为：
（1）无菌、无毒        血清（血浆）      维持培养液的PH
（2）逆（反）转录酶       启动子、终止子
（3）骨髓        特异性
（4）放射性同位素（荧光）

点评 本题考查动物细胞培养、基因工程等相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力．