【题目】下图为获得抗除草剂转基因玉米的技术路线，请回答：
（1）构建表达载体选择限制性核酸内切酶时，要求Ti质粒内每种限制性核酸内切酶只有一个切割位点，同时要求酶切后，G基因形成的两个粘性末端序列不相同，这个过程需用______种限制酶，目的是___________。除草剂抗性基因G和Ti质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是________________________
（2）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带_______________插入受体细胞的核DNA。若核DNA中仅插入一个G基因，自交后代含G基因的植株中，纯合子占________________。
（3）获得抗除草剂转基因玉米涉及到多次筛选，其中筛选含重组质粒的农杆菌应使用含_______________的选择培养基，使用含_______________的选择培养基筛选出转化的愈伤组织，再诱导愈伤组织再生出抗除草剂转基因玉米。
【答案】2 防止酶切产物自身环化 磷酸二酯键 抗除草剂基因G 1/3 抗生素 除草剂
【解析】
基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质-抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（1）在构建基因表达载体时，为了防止酶切产物自身环化，需要使用2种不同的限制酶对目的基因（除草剂抗性基因G）和质粒进行切割；DNA连接酶催化形成的化学键是磷酸二酯键。
（2）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带目的基因（除草剂抗性基因G）插入受体细胞的核DNA；若核DNA中仅插入一个G基因，则转基因植株相当于杂合子，其自交后代含G基因的植株中，纯合子占1/3。
（3）据图分析，图示质粒上的标记基因是抗生素抗性基因，因此筛选含重组质粒的农杆菌应使用含抗生素的选择培养基；应该使用含除草剂的选择培养基筛选出转化的愈伤组织，再诱导愈伤组织再生出抗除草剂转基因玉米。
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【题目】农作物遭受洪水长时间浸泡会出现烂根而死亡，原因是根细胞厌氧呼吸产生的乙醇对细胞有毒害作用。乙醇对动物神经行为能力也有影响。
（1）根细胞厌氧呼吸除产生乙醇外还产生的物质有________________，该过程发生的场所是_____________________________。
（2）有研究表明药物A能加快动物体内酒精的代谢，从而降低体内的酒精浓度，减缓酒精对动物神经系统的损害和神经活动的影响。在设计实验验证该结论时，实验中自变量是________________，检测指标是___________________。
（3）为研究不同酒精浓度及处理时间对生长状况相似细胞的毒害作用，请帮助某生物兴趣小组完成实验。
实验材料：洋葱、质量分数30%的酒精溶液、蒸馏水、0.3 g/mL的蔗糖溶液、吸水纸、载玻片、盖玻片。
（要求：答题时对酒精溶液的具体配制、待观察装片的具体制作不作要求）
实验思路：____________
实验结果与如下图所示。
a．通过观察细胞是否发生________，来判断植物细胞的死活，进而来了解酒精对生长状况相似的不同细胞的毒害作用。
b．试绘出不同浓度酒精溶液作用细胞2．5a分钟时质壁分离细胞所占百分率坐标曲线图。_________
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【题目】如图为某单基因遗传病的家系图，已知Ⅱ1的家族中不存在该致病基因，下列叙述正确的是（ ）
A.该病是伴X隐性遗传病
B.Ⅱ4与Ⅰ2基因型相同的概率为2/3
C.若甲为正常男孩，则甲携带该致病基因的概率为7/17
D.若Ⅱ3与Ⅱ1家族中一正常男性婚配，所生男孩均患病
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【题目】同位素可用于追踪物质的运行和变化规律，下列这些同位素示踪实验中结果描述正确的是（ ）
A.给马铃薯提供14CO2，则其块茎细胞在缺氧状态有可能出现14C2H5OH
B.给洋葱根尖细胞提供含3H-尿嘧啶核糖核苷酸，只能在分生区细胞中检测到放射性
C.利用15N标记某丙氨酸，附着在内质网上的核糖体将出现放射性，而游离的核糖体无放射性
D.小白鼠吸入18O2，则在其尿液中可以检测到H218O，呼出的CO2也可能含有18O
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【题目】回答与分离以尿素为氮源的微生物有关的问题：
（1）有些细菌含有_________，它们可以通过降解尿素作为其生长的氮源。请用化学反应式表示这类细菌降解尿素的过程____________________。
（2）本实验需通过比较尿素固体培养基和 LB 固体培养基菌上的落数，了解土壤稀释液中能以尿素为氮源的微生物的比例，因此要用____________（填方法）进行接种。配置培养基时选择琼脂糖作为凝固剂的原因是___________。尿素溶液的灭菌选择的方法是______。
（3）已知氨与纳氏试剂反应生成淡红色络合物。为了定量测定所分离的微生物对尿素的降解能力，可选用液体培养基培养，并利用光电比色法测定培养液 NH3 的含量。步骤如下：第一步，预实验。将培养液过滤和脱色处理后，用纳氏试剂显色处理。用光程为 1cm 的比色杯在 570nm 处测定光密度值。若光密度值偏低，应选择____（ A．增大光程，光波长不变B．增大光程，光波长增加 C．减小光程，光波长不变 D．减小光程，光波长增加）处再次测定光密度值， 直到数据适宜为止。第二步，标准曲线的制作。用蒸馏水配制______，与纳氏试剂反应后，用比色计测定，并制作____________的标准曲线。第三步，样品处理。将培养液过滤后，进行脱色处理，用纳氏试剂显色处理。
第四步，样品测定与计算。
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【题目】图为某高等动物细胞内一对同源染色体的示意图（图中1-8表示基因）。下列叙述正确的是（ ）
A.基因1和3属于一对等位基因
B.基因6和7，在减I前期有可能发生基因重组
C.基因5和6如果不同，则一定是基因突变的结果
D.基因3和4分离的时期，不同分裂方式的细胞中染色体数目不同
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【题目】血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要成分，负责血液中O2或CO2的运输。下面是血红蛋白的提取和分离的流程图。回答下列问题。
（1）红细胞中血红蛋白的作用，体现了蛋白质的_________功能。
（2）提取血红蛋白最好用哺乳动物的红细胞，主要原因是__________。采集新鲜血液前，要在采血容器中加入柠檬酸钠溶液，其目的是____________________。
（3）红细胞的洗涤要用_____________反复冲洗、离心，洗涤好的红细胞在蒸馏水和甲苯的作用下破裂，释放出血红蛋白。将分离的血红蛋白溶液进行透析的目的是去除___________的杂质。
（4）凝胶色谱法是根据__________________分离蛋白质的有效方法。血红蛋白呈红色这一特点在凝胶色谱法分离血红蛋白中的作用是_______________________。
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【题目】下图是分离烟草原生质体的过程，下列说法错误的是（ ）
A.制备原生质体的叶片应采用高压蒸汽法进行消毒
B.制备原生质体的酶溶液可能含纤维素酶和果胶酶
C.血细胞计数板是检测原生质体密度的工具之一
D.分裂出的烟草原生质体可用于植物体细胞杂交
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【题目】阅读下列材料，回答（1）～（4）题。
肿瘤细胞中相关基因甲基化修饰调节细胞自噬过程
细胞自噬是真核生物对细胞内物质进行周转的重要过程。细胞自噬过程中，一些损伤的蛋白或细胞器被双层膜结构包裹后形成自噬体，与溶酶体（动物）或液泡（酵母和植物）融合后，其内的物质被降解后得以循环利用。下图表示细胞内自噬体的形成及溶酶体参与自噬的过程。
细胞自噬过程受到自噬相关基因调控， 但是这些基因的表达过度上调会导致自噬异常激活， 最终引起“自噬性细胞死亡”。细胞自噬在细胞废物清除、结构重建、生长发育中起重要作用， 而自噬功能紊乱则会导致肿瘤发生、神经退行性疾病和微生物感染等问题。
在机体肿瘤发生早期， 细胞自噬促进癌细胞发生凋亡以抑制肿瘤发生；而在肿瘤发生晚期，恶性肿瘤增殖达到相当数量时， 肿瘤细胞要借助细胞自噬作用对抗营养缺乏和缺氧以及放射造成的损伤。肿瘤细胞抑癌基因DNA甲基化（有多个碱基上连接甲基基团）可能具有调节细胞自噬的作用。
NOR1是一种抑癌基因，鼻咽癌细胞中NOR1的启动子呈高度甲基化状态，导致NOR1蛋白含量很低。当用DNA甲基抑制剂处理鼻咽癌细胞后，NOR1表达得到恢复，抑制了自噬体囊泡的形成， 癌细胞的自噬作用受到抑制， 能量代谢和细胞活性下降，癌细胞的增殖和生存能力降低。
抑癌基因PCDH17在胃和结肠直肠细胞中表达正常， 而在胃癌和结肠直肠癌细胞中高度甲基化而近乎沉默。研究表明，PCDH17低表达与其基因甲基化及蛋白乙酰化有关。进一步研究发现，当细胞中PCDH17基因过量表达后，多个自噬相关基因表达上调，细胞自噬作用增强，癌细胞中发生自噬性细胞死亡的比例上升，从而达到抑癌效果。
（1）图示细胞自噬过程中，内质网膜由于具有____________的特点，可将损伤的细胞器包裹成自噬体。自噬体与溶酶体融合后，其内的多种____________将损伤细胞器降解以循环利用。
（2）分析文中“鼻咽癌细胞中NOR1的启动子呈高度甲基化状态，导致NOR1蛋白含量很低”的原因是_______________。
（3）结合文中信息，简要说明抑癌基因NOR1和PCDH17抑制细胞癌变的作用机制分别是______________、_______________。
（4）除文中提到的两个抑癌基因的作用机制外，结合所学知识，推测抑癌基因还可以通过调控哪些途径达到抑制细胞癌变的作用_______________。（提出一点即可）
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