Question

6．兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转让入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：
（1）从兔肝细胞中提取mRNA，在逆转录酶的作用下形成互补DNA，然后以此DNA为模板在体外利用聚合酶链式（PCR）反应大量扩增，得到基因E．在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成重组DNA分子，再导入用氯化钙处理的农杆菌，侵染矮牵牛叶片．将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛．其中培养过程正确的是B（A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织   B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽   C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根   D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株）．
（2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于摇床上，进行液体悬浮培养．一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达．培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是维持渗透压，从而使叶片保持正常形态．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）以mRNA为模板合成DNA的过程为逆转录过程，该过程需要逆转录酶的催化；体外扩增DNA可采用PCR技术；在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成重组DNA分子；将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用氯化钙处理微生物细胞，使之处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态；将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法．
A．叶片在含合适浓度生长素和细胞分裂素的培养基上脱分化形成愈伤组织，A错误；
B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽，B正确；
C．再生的芽在生长素含量高的培养基上生根，C错误； 
D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上再分化形成再生植株，D错误．
故选：B．
（2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于摇床上，进行液体悬浮培养．一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达．培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是维持渗透压，从而使叶片保持正常形态．
故答案为：
（1）逆转录 聚合酶链式（PCR）   重组DNA分子    农杆菌    B   
（2）摇床    维持渗透压

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．