Question

【题目】重庆市柑橘产量位居全国前列，且种类丰富。请就重庆各地柑橘产品回答下列问题：

（1）潼南柠檬富含维生素C、柠檬酸等对人体有益的成分，可采用___________法制备柠檬精油，制备过程中加入NaHCO3和Na2SO4的目的是__________________________________________。

（2）长寿柚、梁平柚等均享有盛名，柚子皮用于提取柚皮精油或制备生物活性炭，柚肉用于生产果汁，加入的果胶酶包括______________________和多聚半乳糖醛酸酶，可使浑浊的果汁变得澄清。在工业生产中还可利用_________________法将果胶酶进行固定化处理，与一般酶制剂相比，固定化酶的突出优点是_________________________________________________________。

（3）奉节脐橙作为重庆柑橘的一张名片为大家熟知和喜爱。西南大学某科研小组设计实验寻找制作脐橙果酒的耐酸优良酵母菌种，实验步骤如下：

①土壤取样：三峡库区脐橙主产区果园土壤，去除表层浮土，取5~25cm处土样，立即装入无菌袋。

②增菌：取10g土样于90mL液体培养基A（添加0．3%~0．5%的醋酸）中，28℃，200转/分钟摇瓶培养48h。本步骤的目的是增加菌体浓度以及__________________________。

③纯化：菌液逐级稀释，选择10-4、10-5、10-6三个梯度各0．1mL涂布于WL培养基上，不同酵母菌对WL培养基含有的溴甲酚绿吸收能力不同，因而菌落呈现出黄色至深绿色的不同颜色，以此能明显区分不同种酵母菌，则WL培养基是__________（填“选择”或“鉴别”）培养基。

④筛选：将纯化的各单菌落分别接入10mL橙汁中，比较各菌株产气速度和产气量，测定酒精度，筛选出发酵性能优良的酵母菌株。

⑤保藏：长期保存可使用甘油管藏法，其中甘油瓶和甘油需使用_______________法灭菌，再加入菌液进行保存。

Answer 1

【答案】压榨 使柠檬油易于与水分离 果胶分解酶、果胶酯酶 物理吸附、化学结合 易与产物分离，可反复利用 筛选耐酸酵母菌 鉴别 高压蒸汽灭菌

【解析】

1、果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要成分之一。果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁和胞间层。在果汁生产中应用果胶酶可以提高出汁率和澄清度。

2、制作固定化酵母细胞的实验步骤：①酵母细胞的活化；②配制0.05mol/L的CaCl2溶液；③配制海藻酸钠溶液（该实验成败的关键步骤）；④海藻酸钠溶液与酵母细胞混合；⑤固定化酵母细胞。影响实验成败的关键步骤是配制海藻酸钠溶液。

3、柠檬精油无色透明，主要储存在柠檬皮部分，由于柠檬精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解，又会产生原料焦糊问题，所以一般采用压榨法提取，其提取过程为：石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→再次过滤→柠檬精油。

（1）制备柠檬精油可采用压榨法。为了提高出油率，需将柠檬皮干燥去水并用石灰水浸泡。制备过程中加入NaHCO3和Na2SO4可以使柠檬油易于与水分离。

（2）果胶酶包括果胶分解酶、果胶酯酶和多聚半乳糖醛酸酶，果胶被分解成可溶性的半乳糖醛酸，可使果汁变得澄清。固定化酶通过物理吸附法、化学结合法等固定，既容易与产物分离，又可以反复利用。

（3）②果园土壤或果皮都含有丰富的酵母菌，取出的土样中有多种微生物，需要将耐酸酵母菌筛选出来，因此，使用添加0．3%～0．5%的醋酸的液体培养基A是选择培养基，既可以初步筛选出目的菌种，又能扩大培养。

③扩大培养后的菌液还需要采用稀释涂布平板法进行分离纯化，使用的WL培养基是在普通培养基的基础上添加了溴甲酚绿，这样可以通过菌落的颜色辅助鉴别目的菌种，其属于鉴别培养基。

④纯化后的各个菌落发酵性能也有差异，还需要进行发酵实验做进一步的比较，最终确定发酵性能优良的酵母菌株。

⑤菌株在进行临时保藏时，培养基营养物质在不断消耗，同时培养基中还聚集了酵母菌代谢产物，将会影响繁殖甚至诱发变异，因此需定期更换新的培养基。长期保存使用的甘油瓶和甘油需高压蒸汽灭菌法灭菌后使用。