Question

白细胞介素是一类淋巴因子．研究人员将白细胞介素的基因导入到酵母细胞中，使其分泌出有活性的人白细胞介素．
（1）目的基因获取和扩增：
①从健康人体外周静脉血分离得到淋巴细胞，于37℃培养48h，提取细胞总RNA，经

 

作用生成cDNA．
②根据已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通过PCR扩增获取目的基因，此时需要加入的反应物与生成cDNA时所加反应物不同的是

 

（至少写出两种）．
（2）重组载体的构建：由图中可知：酶切载体和目的基因用的是

 

酶，经DNA连接酶处理，形成重组载体．重组载体的化学本质是

 

．
（3）将重组载体导入酵母细胞，在培养液中培养一段时间后，利用纯化的产物进行肿瘤细胞培养实验，可研究人的白细胞介素对

 

作用．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析题图：图示表示基因表达载体的构建过程，载体和目的基因都有限制酶EcoRⅠ与EcoR52的切割位点，所以切割载体和目的基因时用限制酶EcoRⅠ与EcoR52，再用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组载体．

解答： 解：（1）以RNA为模板合成cDNA称为逆转录（反转录），该过程需要模板（RNA）、酶（逆转录酶和DNA聚合酶）、原料（脱氧核苷酸）和能量．采用PCR技术扩增获取目的基因时需要模板（cDNA）、酶（热稳定DNA聚合酶）、原料（脱氧核苷酸）、引物．因此，根据已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通过PCR扩增获取目的基因，此时需要加入的反应物与生成cDNA时所加反应物不同的是：模板cDNA、耐高温（热稳定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物．
（2）由图示可知载体和目的基因都有限制酶EcoRⅠ与EcoR52的识别位点和切割位点，所以酶切载体和目的基因用的是两种限制酶EcoRⅠ与EcoR52，重组载体实际上是重组DNA，因而其化学本质是DNA．
（3）白细胞介素可治疗癌症，因此可推知白细胞介素可抑制肿瘤细胞的增殖．因此利用纯化的产物进行细胞培养实验，可研究人白细胞介素抑制肿瘤细胞增殖的作用．
故答案为：
（1）反转录  模板cDNA  热稳定DNA聚合酶  引物
（2）两种限制酶EcoRⅠ与EcoR52    DNA
（3）促进淋巴细胞增殖（抑制肿瘤细胞增殖）

点评：本题结合图解，综合考查免疫、基因工程、PCR技术、微生物的培养和分离等知识，要求考生识记人体免疫细胞的组成及特异性免疫过程；识记基因工程的工具及操作步骤；掌握纯合微生物的方法，能运用所学的知识答题．